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泻心汤是一种传统的中药方剂,由大黄、黄连、黄芩组成,现代药理学证明了泻心汤有多种药理作用。本实验室的前期研究表明,泻心汤有抗大鼠糖尿病肾病的作用。
本文以泻心汤复方为研究对象,建立了同时定量测定大鼠血浆中泻心汤11种有效成分的LC-MS/MS分析方法,并用于实验性糖尿病模型大鼠体内的药代动力学研究,为进一步的研究提供基础。
一、同时定量测定大鼠血浆中泻心汤多种有效成分LC-MS/MS分析方法研究
建立了同时定量测定大鼠血浆中泻心汤中11种有效组分(黄连碱、药根碱、小檗碱、巴马汀、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、大黄酸、大黄素以及芦荟大黄素)的LC-MS/MS分析方法。血浆样品用乙腈1:3蛋白沉淀,然后用超纯水稀释一倍后,采用乙腈:4 mM醋酸铵:甲酸为流动相,梯度洗脱,起始比例为(35:65:0.08,v/v/v),经迪马C18柱进行色谱分离,流速为0.60 mL/min。在API 4000型串联质谱仪上用ESI源以正负离子切换的多反应监测(MRM)进行监测。标准曲线线性良好(r>0.995),线性范围:黄连碱、药根碱、小檗碱、巴马汀均为0.47-60 ng/mL,黄芩苷15-1,930 ng/mL,黄芩素20-2,560 ng/mL,汉黄芩苷14-1,790 ng/mL,汉黄芩素0.57-72.8 ng/mL,大黄酸10-1,280 ng/mL,大黄素0.6-76.8 ng/mL,以及芦荟大黄素3-384 ng/mL。日内和日间变异均小于10.2%,准确度的标准偏差在±10.84%以内。同已报道的方法相比,此方法能用更少的血浆样品同时定量测定更多泻心汤中的有效组分。
二、泻心汤在糖尿病模型大鼠体内的药代动力学研究
高糖高脂饲料+链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病模型大鼠和正常大鼠各6只,禁食12小时后,灌胃给药泻心汤提取物3.64 g/kg。于给药前和给药后定时取血,用前述建立的方法测定血浆中多种有效成分(黄连碱、药根碱、小檗碱、巴马汀、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、大黄酸、大黄素以及芦荟大黄素)浓度,浓度一时间数据用非房室模型计算药代动力学参数。
结果:发现:与正常大鼠比较,糖尿病模型大鼠灌胃给予泻心汤后,大鼠血浆黄芩苷、汉黄芩素、大黄酸、大黄素、药根碱和巴马汀的浓度低于正常大鼠的浓度,大黄酸、大黄素和小檗碱的AuCo-t减小。结果表明糖尿病模型动物体内,泻心汤有效成分的药动学过程发生了变化。