【摘 要】
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乳铁蛋白(Lactoferrin,LF)是由哺乳动物乳腺和其他外分泌腺产生的一种铁结合糖蛋白,广泛存在于乳汁、唾液、眼泪等分泌物中,因其具有抗病毒、杀菌、免疫调节、基因转录活化等
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乳铁蛋白(Lactoferrin,LF)是由哺乳动物乳腺和其他外分泌腺产生的一种铁结合糖蛋白,广泛存在于乳汁、唾液、眼泪等分泌物中,因其具有抗病毒、杀菌、免疫调节、基因转录活化等多种生物学活性而受到普遍关注和广泛重视,自被发现以来就一直是世界各国学者研究的热点.毕赤酵母是近年来发展起来的一种新型酵母表达系统,它兼有原核细胞的生长特性和分子遗传背景,又有真核生物的特性,可以对外源蛋白质进行蛋白质糖基化、二硫键形成等翻译后修饰,在过去的20年中已经有超过200种不同的蛋白质在毕赤酵母中实现了成功表达.该实验以采自北京友谊医院孕妇全血作为材料,提取嗜中性粒细胞,运用RT-PCR方法扩增了人乳铁蛋白的Cdna,将其克隆到pGEM-T easy载体上并进行序列测定与分析.结果表明,所克隆的hLF cDNA序列全长为213bp,我们将该实验所得人乳铁蛋白序列与GenBank中登录的其它8个hLF cDNA序列进行同源性比较,同源性均在99﹪以上.总之,该实验克隆了人乳铁蛋白基因,并且构建了酵母表达质粒,探索了毕赤酵母生长、转化、筛选、诱导表达及蛋白检测等一系列软件,初步构建了一套酵母表达系统,并且分泌性表达了人乳铁蛋白,为以后规模化发酵生产奠定了基础.
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