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目的:本研究拟在体外细胞水平验证mi R-145作用的靶基因为PAK4,明确mi R-145通过调控PAK4而影响肠癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力,进一步探讨mi R-145/PAK4对下游信号通路LIMK1/cofilin的调控。方法:1.通过萤光素酶报告基因检测方法分析mi R-145与PAK4间的相互影响。2.构建过表达mi R-145、沉默PAK4稳定肠癌细胞株,利用MTT、Transwell、Transwell with matrigel方法检测肠癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力改变。3.利用western blotting方法检测mi R-145过表达和PAK4沉默后对下游LIMK1/cofilin信号通路蛋白的影响。结果:1.构建野生型报告基因质粒psi CHECK2-PAK4-WT和突变型报告基因质粒psi CHECK2-PAK4-MUT,过表达mi R-145的质粒p CDH-mi R-145和空白质粒p CDH-V,将psi CHECK2-PAK4-WT或psi CHECK2-PAK4-MUT与p CDH-mi R-145或p CDH-V共转染HEK293T细胞株,报告基因检测结果显示,mi R-145能抑制野生型报告基因psi CHECK2-PAK4-WT的萤光素酶活性,但对突变型报告基因psi CHECK2-PAK4-MUT萤光素酶活性无明显影响。构建p CDH-anti-mi R-145质粒,将psi CHECK2-PAK4WT或psi CHECK2-PAK4-MUT与p CDH-anti-mi R-145或p CDH-V共转染NCM460细胞株,报告基因检测结果显示,anti-mi R-145能上调野生型报告基因psi CHECK2-PAK4-WT的萤光素酶活性,但对突变型报告基因psi CHECK2-PAK4-MUT萤光素酶活性无明显影响。2.构建过表达mi R-145的SW1116稳定细胞株和沉默PAK4的SW1116稳定细胞株,利用MTT、Transwell、Transwell with matrigel方法检测过表达mi R-145和沉默PAK4对肠癌细胞SW1116增殖、迁移、侵袭能力的影响,结果显示,与对照组相比,过表达mi R-145能抑制肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,沉默PAK4同样也能抑制肠癌细胞的增殖、迁移、侵袭。3.利用western blotting方法分析,发现过表达mi R-145后LIMK1和cofilin磷酸化水平明显降低,沉默PAK4后同样发现LIMK1和cofilin磷酸化水平明显降低。结论:1.mi R-145作用的靶基因为PAK4。2.mi R-145通过作用于PAK4抑制肠癌细胞的增殖、迁移与侵袭。3.mi R-145作用于靶基因PAK4下调信号通路LIMK1/confilin抑制结直肠癌的侵袭转移。