粪肠球菌制备乳酸氧化酶(LODⅡ)初探

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乳酸氧化酶是一种能催化乳酸氧化的生物催化剂.据报道能催化乳酸氧化的酶有乳酸脱氢酶(LDH)、乳酸加单氧酶(LOD Ⅰ)、乳酸氧化酶(LODⅡ).乳酸氧化酶(LODⅡ)能催化乳酸氧化产生丙酮酸和过氧化氢,据此,人们配制了商品试剂盒和生物传感器,通过快速检测过氧化氢的生成量,推算出乳酸的含量,此法快速简便准确,已被广泛应用于临床医学上和发酵工业中对乳酸的测定.此酶除用作乳酸的测定外,还是酶法生产丙酮酸理想的酶.许多微生物例如粪链球菌、耐辐射链球菌、金黄色微球菌等能够产生此酶,并在诱导物存在下,可提高产酶量,因此,通过微生物发酵生产此酶成为可能.该试验用粪肠球菌做了制备LODⅡ的探讨.该文主要讨论了用粪肠球菌制备LODⅡ的状况,首先找到了一种快速测定酶活的方法,即用生物传感器测定相对酶活的方法,还用乳酸消耗法测定了绝对酶活,并找寻到它们间的关系,即相对酶活100相当于O.045u/mg.其次讨论了菌种的选取,认定了粪肠球菌所产生的酶即是LODⅡ,然后讨论了各种因素对摇瓶发酵过程的影响,并优化了摇瓶培养基配方.该文还详尽介绍了用液相色谱仪制备LODⅡ的方法,按照此方法制得的LODⅡ的收率为23.1﹪,纯化倍数为30.9﹪,只是酶的比活力偏低为1.08U/mg.再次,我们对酶液的一些性质做了粗浅的认识,最后对菌种进行了紫外线诱变,结果产生了一个诱变菌株,通过培养与摇瓶发酵与出发菌株比较,有其新的特点,菌体变小,繁殖能力增强,能充分利用乳酸作为诱导物,发酵液酶活高,而菌体破壁后酶活极低,用发酵液作为粗酶制备液,经过液相色谱柱脱盐后,酶活低.该文只是摸索着做了一次用粪肠球菌(Enterococcus faecalis)制备LODⅡ实践,它的很多性质还不为人知,我们只能算是为中国生产商品化的LODⅡ做些理论上及实践上的探索.该文的不足之处在于所制备的乳酸氧化酶的比活力低,很难与国际化的商品酶抗衡.希望中国的科研工作者能早日制备出商品化的LODⅡ,改变目前需要依赖进口的现状.
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