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本文主要从以下几个部分展开论述：
第一部分：缺氧诱导因子1(hypoxia inducible factor-1，HIF1)α亚基的表达水平与非小细胞肺癌预后的相关性研究
目的：明确HIF-1α的表达水平与非小细胞肺癌病例的淋巴结转移、分化状态、TNM分期等临床特征及预后的关系。
方法：1.利用Oncomine在线分析软件比较TCGA数据库中Wachi lung肺鳞癌数据集和Stearman lung肺腺癌数据集中癌组织和癌旁组织的HIF-1αmRNA水平。2.利用免疫组织化学法检测187例非小细胞肺癌组织样本中HIF-1α的表达水平。3.利用Kaplan-Meier法对具有不同HIF-1α表达水平的非小细胞肺癌患者的预后进行差异分析。4.结合187例非小细胞肺癌病例的临床资料，探究HIF-1α的表达水平与非小细胞肺癌淋巴结转移、分化状态、TNM分期等临床特征的关系。
结果：1.在Wachi lung和Stearman lung数据集中，肺鳞癌和腺癌组织内HIF-1αmRNA水平明显高于正常肺组织。2.HIF-1α高表达的非小细胞肺癌患者五年总生存期显著低于HIF-1α低表达的患者(18.28％vs34.04％;P=0.0001)。3.HIF-1α的表达水平与非小细胞肺癌的肿瘤大小，淋巴结转移，分化状态以及TNM分期存在关联。
结论：相较于癌旁正常组织，HIF-1α的表达水平在非小细胞肺癌组织中显著升高。而高表达的HIF-1α与非小细胞肺癌的恶性临床特征以及较差的预后存在关联。
第二部分:丙泊酚抑制脂多糖(LPS)诱导的非小细胞肺癌细胞HIF-1α表达上调的研究
目的:探究LPS和丙泊酚对非小细胞肺癌细胞中HIF-1α表达的影响。
方法:1.不同浓度的LPS（0、1、5、10 μg/ml）与非小细胞肺癌A549细胞共培养，利用荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测细胞内HIF-1α mRNA的表达水平;免疫印迹法(Western blot)检测细胞内HIF-1α蛋白的表达水平;化学发光定量法检测细胞内氧自由基ROS水平。2.A549细胞在10 μg/ml LPS培养条件下，用不同浓度的丙泊酚(0、5、10、20 μg/ml)处理细胞，利用qRT-PCR检测细胞内HIF-1α mRNA的表达水平; Western blot检测细胞内HIF-1α蛋白的表达水平;化学发光定量法检测细胞内氧自由基ROS水平。3.将A549细胞分为对照组，LPS组(10μg/ml)及丙泊酚组（10 μg/ml LPS+20μg/ml丙泊酚）处理A549细胞12小时后，分别采用环己酰亚胺追踪实验(CHX-Chase assay)检测细胞内HIF-1α的蛋白稳定性;免疫荧光实验(IF)检测HIF-1α蛋白的亚细胞定位;报告基因实验(reporter assay)检测细胞内HIF-1的转录活性。
结果:1.LPS诱导非小细胞肺癌A549细胞中HIF-1α的表达上调及氧自由基的产生(ROS)。2.丙泊酚抑制LPS诱导的HIF-1 α表达及氧自由基的产生(ROS)。3.丙泊酚下调LPS诱导的HIF-1α蛋白稳定性及核聚集，抑制HIF-1α的转录功能。
结论:LPS通过促进非小细胞肺癌细胞中HIF-1α的表达、蛋白稳定性以及入核，增强HIF-1的转录活性。而丙泊酚能够抑制LPS对HIF-1α的激活作用。
第三部分:miR-199a-5p在丙泊酚抑制LPS诱导非小细胞肺癌HIF-1Ⅱ表达中的作用研究
目的:探究丙泊酚在LPS诱导非小细胞肺癌HIF-1α表达中的作用是否受到miR-199的调控及其机制。
方法: 1.利用targetscan，BiBiserv2软件预测HIF-1α基因mRNA 3UTR上可能的miR-199结合位点。2.利用荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测细胞内HIF-1αmRNA和miR-199a/b-5p的表达水平。3.利用免疫印迹法(Western blot)检测细胞内HIF-1α蛋白的表达水平。4.报告基因实验(reporter assay)检测miR-199a-5p对HIF-1α mRNA的调控作用。5.亚硫酸氢盐测序法(Bisulfite genomic sequencing)检测miR-199a启动子CpG岛的甲基化水平。
结果:1.在A549细胞中，miR-199a-5p通过直接靶向HIF-1α mRNA 3UTR抑制HIF-1α的表达。2.LPS诱导A549细胞中miR-199a-5p的表达下调，从而促进了HIF-1α的表达;而丙泊酚解除了LPS对miR-199a-5p表达的抑制作用，从而降低了HIF-1α的表达。3.LPS处理A549细胞后，miR-199a基因启动子CpG岛的甲基化水平增强;而丙泊酚抑制了LPS诱导的甲基化。4.使用过氧化氢酶清除LPS诱导的ROS抑制了miR-199a基因启动子CpG岛的甲基化，从而促进了miR-199a-5p水平升高。5.在A549细胞中，抑制LPS诱导的miR-199a基因启动子甲基化促进了miR-199a-5p水平升高，从而抑制了HIF-1α的表达。
结论:丙泊酚通过抑制LPS诱导的miR-199a基因启动子甲基化促进miR-199a-5p水平上调，从而抑制HIF-1α的表达。
第四部分:丙泊酚抑制LPS诱导的非小细胞肺癌的上皮间质转化(EMT)的研究
目的:探究丙泊酚抑制LPS诱导的非小细胞肺癌的上皮间质转化(EMT)的影响。
方法:采用LPS（10μg/ml）或LPS（10μg/ml）联合丙泊酚（20μg/ml）处理A549细胞。1.利用荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测细胞内E-cadherin、Vimentin以及MMP2/9 mRNA的表达水平。2.利用免疫印迹法(Western blot)检测细胞内E-cadherin、Vimentin以及MMP2/9蛋白的表达水平。3.划痕实验(Wound healingassay)检测细胞迁移能力。4.浸润实验(Transwell assay)检测细胞侵袭能力。
结果:1.LPS引起A549细胞中表皮型标志分子E-cadherin下调及间质型标志分子Vimentin上调，而丙泊酚抑制了LPS对E-cadherin和Vimentin表达的影响。2.LPS引起A549细胞中基质金属蛋白酶MMP2/9的水平上调，而丙泊酚抑制了LPS对MMP2/9表达的影响。3.在LPS处理的A549细胞中，敲低HIF-1α抑制了Vimentin和MMP2/9的表达，同时促进了E-cadherin的表达。4.LPS促进A549细胞迁移和侵袭能力，而丙泊酚能够抑制LPS对A549细胞恶性表型的促进作用。然而过表达HIF-1α显著削弱了丙泊酚对A549细胞迁移和侵袭的抑制作用。
结论:丙泊酚通过下调HIF-1α抑制LPS诱导的非小细胞肺癌EMT过程及恶性表型。
第一部分：缺氧诱导因子1(hypoxia inducible factor-1，HIF1)α亚基的表达水平与非小细胞肺癌预后的相关性研究
目的：明确HIF-1α的表达水平与非小细胞肺癌病例的淋巴结转移、分化状态、TNM分期等临床特征及预后的关系。
方法：1.利用Oncomine在线分析软件比较TCGA数据库中Wachi lung肺鳞癌数据集和Stearman lung肺腺癌数据集中癌组织和癌旁组织的HIF-1αmRNA水平。2.利用免疫组织化学法检测187例非小细胞肺癌组织样本中HIF-1α的表达水平。3.利用Kaplan-Meier法对具有不同HIF-1α表达水平的非小细胞肺癌患者的预后进行差异分析。4.结合187例非小细胞肺癌病例的临床资料，探究HIF-1α的表达水平与非小细胞肺癌淋巴结转移、分化状态、TNM分期等临床特征的关系。
结果：1.在Wachi lung和Stearman lung数据集中，肺鳞癌和腺癌组织内HIF-1αmRNA水平明显高于正常肺组织。2.HIF-1α高表达的非小细胞肺癌患者五年总生存期显著低于HIF-1α低表达的患者(18.28％vs34.04％;P=0.0001)。3.HIF-1α的表达水平与非小细胞肺癌的肿瘤大小，淋巴结转移，分化状态以及TNM分期存在关联。
结论：相较于癌旁正常组织，HIF-1α的表达水平在非小细胞肺癌组织中显著升高。而高表达的HIF-1α与非小细胞肺癌的恶性临床特征以及较差的预后存在关联。
第二部分:丙泊酚抑制脂多糖(LPS)诱导的非小细胞肺癌细胞HIF-1α表达上调的研究
目的:探究LPS和丙泊酚对非小细胞肺癌细胞中HIF-1α表达的影响。
方法:1.不同浓度的LPS（0、1、5、10 μg/ml）与非小细胞肺癌A549细胞共培养，利用荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测细胞内HIF-1α mRNA的表达水平;免疫印迹法(Western blot)检测细胞内HIF-1α蛋白的表达水平;化学发光定量法检测细胞内氧自由基ROS水平。2.A549细胞在10 μg/ml LPS培养条件下，用不同浓度的丙泊酚(0、5、10、20 μg/ml)处理细胞，利用qRT-PCR检测细胞内HIF-1α mRNA的表达水平; Western blot检测细胞内HIF-1α蛋白的表达水平;化学发光定量法检测细胞内氧自由基ROS水平。3.将A549细胞分为对照组，LPS组(10μg/ml)及丙泊酚组（10 μg/ml LPS+20μg/ml丙泊酚）处理A549细胞12小时后，分别采用环己酰亚胺追踪实验(CHX-Chase assay)检测细胞内HIF-1α的蛋白稳定性;免疫荧光实验(IF)检测HIF-1α蛋白的亚细胞定位;报告基因实验(reporter assay)检测细胞内HIF-1的转录活性。
结果:1.LPS诱导非小细胞肺癌A549细胞中HIF-1α的表达上调及氧自由基的产生(ROS)。2.丙泊酚抑制LPS诱导的HIF-1 α表达及氧自由基的产生(ROS)。3.丙泊酚下调LPS诱导的HIF-1α蛋白稳定性及核聚集，抑制HIF-1α的转录功能。
结论:LPS通过促进非小细胞肺癌细胞中HIF-1α的表达、蛋白稳定性以及入核，增强HIF-1的转录活性。而丙泊酚能够抑制LPS对HIF-1α的激活作用。
第三部分:miR-199a-5p在丙泊酚抑制LPS诱导非小细胞肺癌HIF-1Ⅱ表达中的作用研究
目的:探究丙泊酚在LPS诱导非小细胞肺癌HIF-1α表达中的作用是否受到miR-199的调控及其机制。
方法: 1.利用targetscan，BiBiserv2软件预测HIF-1α基因mRNA 3UTR上可能的miR-199结合位点。2.利用荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测细胞内HIF-1αmRNA和miR-199a/b-5p的表达水平。3.利用免疫印迹法(Western blot)检测细胞内HIF-1α蛋白的表达水平。4.报告基因实验(reporter assay)检测miR-199a-5p对HIF-1α mRNA的调控作用。5.亚硫酸氢盐测序法(Bisulfite genomic sequencing)检测miR-199a启动子CpG岛的甲基化水平。
结果:1.在A549细胞中，miR-199a-5p通过直接靶向HIF-1α mRNA 3UTR抑制HIF-1α的表达。2.LPS诱导A549细胞中miR-199a-5p的表达下调，从而促进了HIF-1α的表达;而丙泊酚解除了LPS对miR-199a-5p表达的抑制作用，从而降低了HIF-1α的表达。3.LPS处理A549细胞后，miR-199a基因启动子CpG岛的甲基化水平增强;而丙泊酚抑制了LPS诱导的甲基化。4.使用过氧化氢酶清除LPS诱导的ROS抑制了miR-199a基因启动子CpG岛的甲基化，从而促进了miR-199a-5p水平升高。5.在A549细胞中，抑制LPS诱导的miR-199a基因启动子甲基化促进了miR-199a-5p水平升高，从而抑制了HIF-1α的表达。
结论:丙泊酚通过抑制LPS诱导的miR-199a基因启动子甲基化促进miR-199a-5p水平上调，从而抑制HIF-1α的表达。
第四部分:丙泊酚抑制LPS诱导的非小细胞肺癌的上皮间质转化(EMT)的研究
目的:探究丙泊酚抑制LPS诱导的非小细胞肺癌的上皮间质转化(EMT)的影响。
方法:采用LPS（10μg/ml）或LPS（10μg/ml）联合丙泊酚（20μg/ml）处理A549细胞。1.利用荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测细胞内E-cadherin、Vimentin以及MMP2/9 mRNA的表达水平。2.利用免疫印迹法(Western blot)检测细胞内E-cadherin、Vimentin以及MMP2/9蛋白的表达水平。3.划痕实验(Wound healingassay)检测细胞迁移能力。4.浸润实验(Transwell assay)检测细胞侵袭能力。
结果:1.LPS引起A549细胞中表皮型标志分子E-cadherin下调及间质型标志分子Vimentin上调，而丙泊酚抑制了LPS对E-cadherin和Vimentin表达的影响。2.LPS引起A549细胞中基质金属蛋白酶MMP2/9的水平上调，而丙泊酚抑制了LPS对MMP2/9表达的影响。3.在LPS处理的A549细胞中，敲低HIF-1α抑制了Vimentin和MMP2/9的表达，同时促进了E-cadherin的表达。4.LPS促进A549细胞迁移和侵袭能力，而丙泊酚能够抑制LPS对A549细胞恶性表型的促进作用。然而过表达HIF-1α显著削弱了丙泊酚对A549细胞迁移和侵袭的抑制作用。
结论:丙泊酚通过下调HIF-1α抑制LPS诱导的非小细胞肺癌EMT过程及恶性表型。