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本文主要从以下几方面进行论述：
第一部分:胃癌组织及胃癌细胞系中Midkine的表达
目的:通过检测MK在胃癌组织及其配对的癌旁正常组织中的表达差异及MK在正常胃黏膜上皮细胞株及四种胃癌细胞株中的表达量，验证MK在胃癌中的高表达。
方法:收集17例胃癌患者手术切除标本，免疫组化方法检测MK在胃癌及癌旁组织中的表达，Western blot检测MK在胃癌组织及其配对的癌旁正常组织中的表达。
结果:1免疫组化检测结果表明MK在癌组织中的表达显著高于配对的癌旁正常组织。(p＜0.01)。
2 Western blot检测结果表明MK在胃癌细胞系中的表达均高于正常胃黏膜上皮细胞株GES-1，四种胃癌细胞系MK表达按水平由高至低排序为AGS＞MKN-45＞SGC-7901＞803。
结论:MK在胃癌中表达上调，其可能在胃癌发生发展过程中发挥重要作用。
第二部分:rhMK对顺铂抑制胃癌细胞增殖的影响
目的:研究rhMK对顺铂抑制胃癌AGS细胞增殖和凋亡等生物学行为的影响。
方法:应用重组MK蛋白作用于胃癌AGS细胞株，以获得高表达的MK的细胞模型，用western blot验证转染效果。然后用CCK-8方法检测顺铂处理的胃癌细胞增殖情况，AnnexinⅤ/PI双染通过流式细胞仪检测凋亡。
结果:1选择AGS细胞作为体外细胞模型，应用rhMK蛋白进行干预，发现与生理盐水处理的对照组比较，rhMK可以略提高AGS细胞的生存率，但差异不明显(p＞0.05)。
2 CCK-8方法提示顺铂可以杀伤AGS细胞，rhMK可以部分逆转顺铂对胃癌细胞的杀伤作用(p＜0.05)。
3流式细胞仪分析结果显示:与生理盐水对照相比，rhMK干预对AGS细胞的凋亡和坏死影响不大。顺铂可以明显诱导AGS细胞的凋亡和坏死，早期凋亡（28.73.±0.97）％，晚期凋亡（18.87±0.97）％，坏死（10.82±1.38）％;而rhMK可以逆转顺铂的细胞杀伤作用，早期凋亡（26.55±7.37）％，晚期凋亡（14.39±2.53）％，坏死（4.93±3.82）％。
结论:rhMK可减弱顺铂对胃癌细胞株AGS的杀伤作用。
第三部分:MKsiRNA干扰促进顺铂对胃癌毒性作用
目的:研究沉默MK对胃癌AGS细胞增殖和凋亡等生物学行为的影响，分析MK是否是通过Notch影响胃癌细胞耐顺铂生物学行为，并通过裸鼠体内实验研究沉默MK对体内胃癌AGS细胞移植瘤的影响。
方法:首先合成MKsiRNA，用western blot在蛋白水平验证其沉默效率，应用瞬时转染的方法将其转入AGS胃癌细胞以获得低表达的MK细胞模型，然后用CCK-8方法检测顺铂处理肿瘤细胞的增殖情况，AnnexinⅤ/PI双染通过流式细胞仪检测凋亡。Western blot和免疫组化技术检测MK siRNA对肿瘤细胞耐药信号通路(Notch)中相关蛋白Notch1、Notch2及Delta-like1、Jagged1的影响。通过裸鼠成瘤构建动物模型，应用瞬时转染的方法将MK-siRNA转入移植瘤中，然后检测顺铂处理的肿瘤体积与瘤体重量。用Western blot以及免疫组化技术检测MK siRNA对肿瘤细胞耐药通路(Notch)中相关蛋白Notch1、Notch2及Delta-like1的影响。
结果:1 Western blot示:转染MK siRNA后，MK在蛋白水平的表达较阴性对照组显著降低，有显著统计学差异(p＜0.01)。
2 CCK-8方法提示在胃癌细胞AGS中，MK表达水平的下调可促进顺铂抑制细胞增殖。(p＜0.05)
3流式细胞仪分析双染AnnexinⅤ和PI的AGS细胞凋亡比例，结果显示:MKsiRNA实验组的凋亡细胞比例为21.36％，而阴性对照组有6.87％的细胞发生了凋亡，表明沉默MK可以促进顺铂诱导胃癌细胞凋亡。
4 Western blot示:在MK siRNA靶向干涉组，胃癌细胞耐药信号通路(Notch)蛋白的表达水平下降有显著统计学差异(p＜0.01)。
5裸鼠体内成瘤实验表明，沉默MK后，实验组无论肿瘤体积还是瘤体重量，较对照组均显著减少，有显著统计学差异(p＜0.01)。
6 Western blot结果示:转染MK siRNA后，Notch信号通路相关蛋白水平的表达较阴性对照组均显著降低，有显著统计学差异(p＜0.01)
结论:在体内外MK均通过调控Notch耐药信号通路影响顺铂对胃癌毒性作用。
第一部分:胃癌组织及胃癌细胞系中Midkine的表达
目的:通过检测MK在胃癌组织及其配对的癌旁正常组织中的表达差异及MK在正常胃黏膜上皮细胞株及四种胃癌细胞株中的表达量，验证MK在胃癌中的高表达。
方法:收集17例胃癌患者手术切除标本，免疫组化方法检测MK在胃癌及癌旁组织中的表达，Western blot检测MK在胃癌组织及其配对的癌旁正常组织中的表达。
结果:1免疫组化检测结果表明MK在癌组织中的表达显著高于配对的癌旁正常组织。(p＜0.01)。
2 Western blot检测结果表明MK在胃癌细胞系中的表达均高于正常胃黏膜上皮细胞株GES-1，四种胃癌细胞系MK表达按水平由高至低排序为AGS＞MKN-45＞SGC-7901＞803。
结论:MK在胃癌中表达上调，其可能在胃癌发生发展过程中发挥重要作用。
第二部分:rhMK对顺铂抑制胃癌细胞增殖的影响
目的:研究rhMK对顺铂抑制胃癌AGS细胞增殖和凋亡等生物学行为的影响。
方法:应用重组MK蛋白作用于胃癌AGS细胞株，以获得高表达的MK的细胞模型，用western blot验证转染效果。然后用CCK-8方法检测顺铂处理的胃癌细胞增殖情况，AnnexinⅤ/PI双染通过流式细胞仪检测凋亡。
结果:1选择AGS细胞作为体外细胞模型，应用rhMK蛋白进行干预，发现与生理盐水处理的对照组比较，rhMK可以略提高AGS细胞的生存率，但差异不明显(p＞0.05)。
2 CCK-8方法提示顺铂可以杀伤AGS细胞，rhMK可以部分逆转顺铂对胃癌细胞的杀伤作用(p＜0.05)。
3流式细胞仪分析结果显示:与生理盐水对照相比，rhMK干预对AGS细胞的凋亡和坏死影响不大。顺铂可以明显诱导AGS细胞的凋亡和坏死，早期凋亡（28.73.±0.97）％，晚期凋亡（18.87±0.97）％，坏死（10.82±1.38）％;而rhMK可以逆转顺铂的细胞杀伤作用，早期凋亡（26.55±7.37）％，晚期凋亡（14.39±2.53）％，坏死（4.93±3.82）％。
结论:rhMK可减弱顺铂对胃癌细胞株AGS的杀伤作用。
第三部分:MKsiRNA干扰促进顺铂对胃癌毒性作用
目的:研究沉默MK对胃癌AGS细胞增殖和凋亡等生物学行为的影响，分析MK是否是通过Notch影响胃癌细胞耐顺铂生物学行为，并通过裸鼠体内实验研究沉默MK对体内胃癌AGS细胞移植瘤的影响。
方法:首先合成MKsiRNA，用western blot在蛋白水平验证其沉默效率，应用瞬时转染的方法将其转入AGS胃癌细胞以获得低表达的MK细胞模型，然后用CCK-8方法检测顺铂处理肿瘤细胞的增殖情况，AnnexinⅤ/PI双染通过流式细胞仪检测凋亡。Western blot和免疫组化技术检测MK siRNA对肿瘤细胞耐药信号通路(Notch)中相关蛋白Notch1、Notch2及Delta-like1、Jagged1的影响。通过裸鼠成瘤构建动物模型，应用瞬时转染的方法将MK-siRNA转入移植瘤中，然后检测顺铂处理的肿瘤体积与瘤体重量。用Western blot以及免疫组化技术检测MK siRNA对肿瘤细胞耐药通路(Notch)中相关蛋白Notch1、Notch2及Delta-like1的影响。
结果:1 Western blot示:转染MK siRNA后，MK在蛋白水平的表达较阴性对照组显著降低，有显著统计学差异(p＜0.01)。
2 CCK-8方法提示在胃癌细胞AGS中，MK表达水平的下调可促进顺铂抑制细胞增殖。(p＜0.05)
3流式细胞仪分析双染AnnexinⅤ和PI的AGS细胞凋亡比例，结果显示:MKsiRNA实验组的凋亡细胞比例为21.36％，而阴性对照组有6.87％的细胞发生了凋亡，表明沉默MK可以促进顺铂诱导胃癌细胞凋亡。
4 Western blot示:在MK siRNA靶向干涉组，胃癌细胞耐药信号通路(Notch)蛋白的表达水平下降有显著统计学差异(p＜0.01)。
5裸鼠体内成瘤实验表明，沉默MK后，实验组无论肿瘤体积还是瘤体重量，较对照组均显著减少，有显著统计学差异(p＜0.01)。
6 Western blot结果示:转染MK siRNA后，Notch信号通路相关蛋白水平的表达较阴性对照组均显著降低，有显著统计学差异(p＜0.01)
结论:在体内外MK均通过调控Notch耐药信号通路影响顺铂对胃癌毒性作用。