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目的本实验利用组织特异性SM22a及KDR启动子／增强子嵌合siRNA可以靶向沉默mTOR信号通路,通过Pluronic F-127缓释系统将其转染于大鼠颈静脉-动脉移植血管模型上,研究其对血管平滑肌细胞、内皮细胞及移植血管新生内膜的影响,探索防治静脉移植血管狭窄的新方法,并为预防移植静脉狭窄提供理论依据。方法构建靶向大鼠mTOR的真核表达载体：SM22a-p/e-mTOR-shRNA, KDR-p/e-mTOR-shRNA, CMV-mTOR-shRNA。建立大鼠颈静脉分支-颈动脉模型。通过Pluronic F-127质粒缓释系统在移植血管周围局部转染shRNA。随机分为7组：A组：25%PluronicF-127组(对照组)；B组：SM22a-p/e-mTOR-shRNA组(SM22a组)；C组：KDR-p/e-mTOR-shRNA组(KDR组)；D组：SM22a-p/e-mTOR-shRNA和KDR-p/e-mTOR-shRNA (共转染组)；E组：CMV-mTOR-shRNA组(CMV组)；F组：空质粒阴性对照组(阴性对照组)；G组：wortmannin阳性对照组(阳性对照组)。根据实验分组的不同,分别将200μL含有50μg shRNA质粒,或50μg wortmannin,或者空白Pluronic F-127凝胶均匀地涂在桥血管的周围。每组20只SD大鼠,分别于1d,3d,7d和14d获取桥血管。HE染色观察新生内膜厚度,采用计算机图像分析系统测量移植静脉吻合口近端平均内膜厚度；a-SM-actin及CD-34免疫组化分别观察平滑肌细胞增殖和内皮细胞完整性。TUNEL检测细胞凋亡情况。结果：成功构建大鼠颈静脉分支-颈动脉间置模型。术后14d时,对照组、SM22α组、阴性对照组内皮细胞基本完整,而KDR组、共转染组、CMV组及阳性对照组内皮细胞仍不完整；术后14d,各组新生内膜厚度比较差异有统计学意义(F=17.44,P<0.05),其中对照组、KDR组、阴性对照组新生内膜增厚最明显,SM22α组、共转染组、CMV组与对照组及阴性对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。术后14d新生内膜厚度与1d相比,对照组、SM22α组、KDR组、共转染组、CMV组、阴性对照组及阳性对照组新生内膜分别增厚12.6倍、9.7倍、10.8倍、1.4倍、5.1倍、7.6倍及2.5倍；术后14d时可见对照组、KDR组、阴性对照组α-SM-actin阳性细胞明显多于SM22a组、共转染组、CMV组和阳性对照组(P<0.05), SM22α组、共转染组、CMV组、阳性对照组阳性细胞面积(1.48±0.09、1.05±0.54、0.97±0.14和0.95±0.37)均低于对照组、KDR组和阴性对照组阳性细胞面积(5.42±0.16、3.2±0.76、3.97±0.69)；术后各组随着时间的推移,移植静脉组织凋亡细胞阳性面积逐渐升高,14天时各组凋亡细胞阳性面积达高峰,对照组、KDR组和阴性对照组凋亡细胞面积(0.43%、0.2%和0.73%)低于SM22a组、共转染组、CMV组和阳性对照组凋亡面积(0.84%、2.4%、1.87%和2.78%)结论大鼠颈静脉分支-颈动脉间置模型是一种研究血管旁路移植术后桥血管狭窄的理想模型；SM22α-p/e-mTOR-shRNA可通过特异性抑制血管平滑肌细胞增殖、促进其凋亡而不影响血管内皮细胞的再生修复,有效减轻移植血管血栓形成和新生内膜增生；KDR-p/e-mTOR-shRNA特异性作用于血管内皮细胞,影响其损伤后再生修复,反证移植血管内皮尽快再生修复可避免或减轻血栓形成,进而减轻新生内膜增生和狭窄程度。