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目的随着我国经济迅速发展,工业废水和生活污水肆意排放,使湖泊水质不断下降,湖泊富营养化状况日益严重,导致水华日益频发。湖泊富营养化已成为当前我们共同面临的环境问题,越来越严重的富营养化,尤其是氮污染,已严重影响着人们的生存环境、社会经济和人体健康。控制氮污染成为治理湖泊富营养化的关键。而生物脱氮技术也因此迅速备受青睐。与物理化学脱氮方法相比,生物脱氮有其独特的优点:无二次污染,脱氮彻底,经济安全等,被认为具有较高可行性的水体脱氮方法。分离获得高活性的反硝化菌株,有助于揭示生物脱氮机理,优化生物脱氮工艺性能,也为生物脱氮工艺提供生产菌株。本研究从洱海沉积物中筛选出1株反硝化能力强的菌株EH3-1-4,对其进行鉴定并研究其生物脱氮活性,旨在为后期治理应用提供依据。方法本课题以洱海沉积物中可培养的反硝化细菌为研究对象,从洱海沉积物中分离培养反硝化细菌,筛选反硝化速率较强的细菌,对其从形态学、生理生化和16SrDNA分子生物学三个方面进行鉴定;同时对鉴定的反硝化细菌生长曲线和反硝化能力进行测定。结果1)本研究从洱海十个点位的沉积物中富集筛选出101株反硝化细菌,同时利用对磺基苯磺酸和a-萘胺的混合溶液显色反应进行菌株反硝化能力的定性测定情况,选出反硝化性能较好的菌株。最终筛选得到1株具有较强反硝化能力的细菌,命名为EH3-1-4;2)该菌株为氧化菌,菌体呈长杆状,革兰染色为阴性;除产脂酶(Tween80)试验外,接触酶(过氧化氢酶)试验、产硫化氢试验和淀粉水解均为阳性;16Sr DNA序列分析表明,分离的菌株EH3-1-4与木糖氧化无色杆菌(Achromobacterxylosoxidans A8)的序列相似性最高,为90%;结合形态学、生理生化鉴定和分子生物学16S rDNA基因序列的同源性比较,以及系统发育分析,基本可以认为菌株EH3-1-4为产碱杆菌属(Achromobacter);3)研究EH3-1-4的生长曲线发现:EH3-1-4该菌株的对数生长期出现在12h,从36h开始进入稳定生长期,稳定生长期较长。其世代周期是3.3h;通过对细菌反硝化能力进行测定发现,菌株EH3-1-4能有效地降解水体中的硝酸盐。在培养第36h,菌体浓度达到最高,降解率达到71%,硝酸盐氮最高降解速率可达1.79mg/L h。结论1)本实验成功从洱海沉积物中分离筛选出1株反硝化性能较好的菌株,命名为EH3-1-4;2)结合形态学、生理生化鉴定和分子生物学16S rDNA基因序列的同源性比较,以及系统发育分析,基本可以认为菌株EH3-1-4为产碱杆菌属(Achromobacter);3)通过反硝化能力测定,发现菌株EH3-1-4能大量降解硝酸盐,说明该菌株具有良好的反硝化活性,说明目的菌株具有很好的应用前景,这对进一步应用研究具有重要意义。