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目的:探讨过氧化氢诱导的视网膜神经节细胞损伤的影响以及骨髓间充质干细胞对过氧化氢诱导的视网膜神经节细胞损伤的保护作用。方法:全骨髓贴壁法培养SD大鼠骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs),光镜下检查其形态特征,并利用流式细胞术检测其细胞表面标记物。采用Thy1免疫组织化学染色鉴定转基因的视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGC-5)。RGC-5细胞暴露于外源性不同浓度过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)24h后,应用CCK-8法检测细胞活性,选取半数存活的浓度,以此构建H2O2氧化损伤模型。光镜下观察RGC-5细胞形态改变,Hoechst荧光染色检测RGC-5细胞凋亡情况。利用transwell共培养将BMSCs细胞与RGC-5细胞共同培养24h和48h。流式细胞术检测RGC-5细胞凋亡情况,ELISA法检测RGC-5细胞上清液炎症因子——肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白介素1β(IL-1β)水平,硫代无巴比妥酸法检测RGC-5细胞内丙二醇(MDA),黄嘌呤氧化酶法检测RGC-5细胞内超氧化物歧化酶(SOD)表达情况,ELISA法检测RGC-5细胞上清液脑源性神经营养因子(BDNF)水平。结果:1.全骨髓贴壁法成功分离培养出BMSCs,光镜下见细胞呈长梭形生长,通过流式细胞术检测第三代细胞表面阳性率分别为CD34:1.75±0.96%,CD44:96.14±2.52%,CD45:2.42±1.00%,CD90:95.53±2.92%。2.Thy1免疫组织化学染色显示RGC-5细胞表面棕黄色染色呈阳性表现。H2O2诱导24h、48h后,倒置相差显微镜下观察到RGC-5细胞数量明显减少,部分细胞体积缩小、形态异常,且细胞聚集成簇,可见细胞贴壁能力下降,细胞上液出现细胞碎片。与正常组相比,Hoechst荧光染色检测可见RGC-5细胞凋亡数量增加,细胞核呈致密浓染,或呈碎块状致密浓染,随H2O2作用时间延长,细胞凋亡数量增加。3.H2O2以半数存活浓度(200umol/l)诱导RGC-5细胞24h后,利用BMSCs细胞共培养24h、48h后,流式细胞检测RGC-5细胞凋亡率明显降低。相较H2O2组,共培养组上清液炎症因子TNF-α及IL-1β水平明显下降,细胞内氧化损伤因子MDA表达减少及细胞内抗氧化损伤因子SOD表达增加,同时,上清液神经营养因子BDNF水平提高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:H2O2诱导后可引起RGC-5细胞损伤,利用BMSCs细胞共培养可显著降低RGC-5细胞凋亡率,其可能通过抑制炎症,缓解氧化损伤,并分泌神经营养因子有关。