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目的: 肠缺血再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤普遍存在于急性肠系膜缺血、严重烧伤、低血容量性或创伤性休克、肠移植等外科手术及危重症疾病中,是肠损伤加重至出现全身炎症反应,再到进行性多器官功能衰竭中十分重要的病理生理过程。有临床研究表明,在重症监护环境中,伴随肠缺血发展所导致的患者死亡率高达67~80%。七氟醚预处理已被证实在肠缺血再灌注损伤中有保护作用。但目前关于七氟醚预处理如何减轻肠缺血再灌注损伤的机制仍未明确。本实验将研究PPARγ/NF-κB信号通路在七氟醚预处理大鼠肠缺血再灌注中的作用及其机制。 方法: 60只成年雄性SD大鼠,体重200~220g,采用随机数字表法随机分配为6组:假手术组(Sham组,不经过缺血再灌注处理,只分离不结扎肠系膜上动脉,n=10)、七氟醚对照组(Sevo+Sham组,行1.2%七氟醚预处理30min,但不经过缺血再灌注处理,n=10)、模型组(I/R组,结扎肠系膜上动脉60min后,再灌注120min处理,n=10)、七氟醚组(Sevo+I/R组,在开腹前行1.2%七氟醚预处理30min,之后建立模型,n=10)、拮抗剂组[GW9662+Sevo+I/R组,在七氟醚预处理前15min腹腔注射PPARγ特异性拮抗剂GW9662(1mg/kg),n=10]、拮抗剂对照组(GW9662+Sham组,n=10),于再灌注120min时,处死大鼠。 (1)肉眼观察不同组别肠组织大体变化; (2)使用酶标仪检测不同组别大鼠血清MDA含量及SOD活力; (3)光学显微镜下观察不同组别肠组织损伤情况,HE染色处理,以改良Chiu’s评分法反映小肠组织损伤情况; (4)采用Westernblot法测定PPARγ、NF-κB P65、Bcl-2、IL-6、TNF-α的蛋白表达水平,采用免疫组化方法测定cleaved caspase-3的表达水平; (5)采用tunel法进行肠粘膜上皮细胞凋亡原位检测,光学显微镜下观察肠组织凋亡情况。 结果: (1)肉眼大体观察发现Sham组、Sevo+sham组及GW9662+sham组手术前后肠组织肉眼观察无明显变化,肠管外形一致,未出现充血变色水肿现象。I/R组建模处理不同时刻肉眼观察可见明显变化,肠管颜色变为暗红或黑色,有明显充血水肿,肠蠕动波消失。I/R组、Sevo+I/R组和GW9662+Sevo+I/R组未见明显差异。 (2)I/R组血清MDA含量相比假手术组明显增多(P<0.01);与I/R组比较,Sevo+I/R组可减少血清MDA含量(P<0.01);而用了GW9662+Sevo+I/R组血清MDA含量高于Sevo+I/R组,差异有统计学意义(P<0.01)。相比Sham组,I/R组、Sevo+I/R组和GW9662+Sevo+I/R组血清SOD活力均降低(P<0.01);Sevo+I/R组较I/R组和GW9662+Sevo+I/R组血清SOD活力有升高但差异无统计学意义(P>0.05)。 (3)光镜下观察肠粘膜变化发现,Sham组、Sevo+sham组及GW9662+sham组未见肠粘膜明显损伤(P>0.05)。I/R组肠粘膜出现明显损伤,主要表现为肠绒毛肿胀、变短、脱落及固有层充血、出血性变化,病变由肠绒毛顶端向固有层深部发展。七氟醚预处理可明显减轻肠粘膜损伤(P<0.05);GW9662+Sevo+I/R组较Sevo+I/R组病理损伤程度更为严重,有大量出血、组织细胞坏死崩解现象(P<0.05) (4)Western blot显示:与Sham组相比,I/R组PPARγ、Bcl-2蛋白表达降低,Sevo+I/R组及GW9662+Sevo+I/R组PPARγ蛋白表达减少,I/R组、Sevo+I/R组及GW9662+Sevo+I/R组NF-κB P65、TNF-α蛋白表达均明显增加(P<0.05);与I/R组相比,Sevo+I/R组PPARγ、Bcl-2蛋白表达增加,NF-κB P65、TNF-α、IL-6蛋白表达明显减少(P<0.05);与Sevo+I/R组比较,GW9662+Sevo+I/R组PPARγ、Bcl-2蛋白表达减少,NF-κB P65、TNF-α、IL-6蛋白表达明显增加(P<0.05)。IHC显示:与Sham组比较,I/R组、Sevo+I/R组和GW9662+Sevo+I/R组表达明显增加(P<0.01)。Sevo+I/R组较I/R组和GW9662+Sevo+I/R组cleaved caspase-3表达明显减少,且细胞染色颜色浅(P<0.05)。 (5)与Sham组相比,经过建模处理的I/R组、Sevo+I/R组和GW9662+Sevo+I/R组肠粘膜TUNEL阳性细胞数目显著增多(P<0.001);而Sevo+I/R组肠粘膜TUNEL阳性细胞数目明显低于I/R组和GW9662+Sevo+I/R组(P<0.001)。 结论: (1)七氟醚预处理对肠缺血再灌注损伤大鼠有保护作用; (2)七氟醚预处理对肠缺血再灌注损伤的保护机理与抗细胞凋亡蛋白增加,减少氧化应激反应及炎性蛋白表达相关 (3)PPARγ参与七氟醚预处理对大鼠肠缺血再灌注损伤模型保护的作用机制,部分通过激活PPARγ/NF-κB信号通路发挥作用。