【摘 要】
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目的本研究通过在PTC组织,PTC患者血液和多种PTC细胞中,通过筛选选出表达上调最高的LncRNA-LUCAT作为研究对象,并进一步通过敲减技术敲减甲状腺癌细胞系中的LncRNA-LUCAT的方式,研究其对甲状腺癌乳头状癌的影响、PTC的转移和侵袭、PTC细胞的EMT的影响。方法选取2020年4月至2021年10月期间,在沈阳医学院附属中心医院普外一科获得的20例PTC组织样本和邻近的正常组织（
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目的本研究通过在PTC组织,PTC患者血液和多种PTC细胞中,通过筛选选出表达上调最高的LncRNA-LUCAT作为研究对象,并进一步通过敲减技术敲减甲状腺癌细胞系中的LncRNA-LUCAT的方式,研究其对甲状腺癌乳头状癌的影响、PTC的转移和侵袭、PTC细胞的EMT的影响。方法选取2020年4月至2021年10月期间,在沈阳医学院附属中心医院普外一科获得的20例PTC组织样本和邻近的正常组织（2cm以内）样本,以及患者和正常人静脉血液样本。所有患者（年龄范围23-76岁;平均年龄45岁）在甲状腺切除术前没有接受任何术前治疗,包括放疗、化疗和左甲状腺素。且不伴有其他恶性肿瘤（胃癌、肝癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌等）或其他甲状腺炎性疾病。所有的组织样本在手术后立即放入至液氮中进行冰冻处理,并且其储存条件为-80℃,直到进一步提取RNA。通过对PTC患者血液和组织样本进行检测,检测lncRNAs的表达情况,筛选出高表达的5个lncRNAs,并对其进行RT-q PCR验证,筛选出表达量最高的lncRNA-LUCAT,随后在多株细胞（甲状腺癌细胞系TPC-1、K1和IHH-4以及人类甲状腺上皮细胞系Nthy-ori3-1）中检测lncRNA的表达水平。并通过细胞内sh RNA敲减甲状腺癌细胞系TPC-1中的lncRNA-LUCAT,通过CCK-8实验和克隆形成实验进一步检测甲状腺癌细胞系TPC-1的增殖变化并与阴性对照sh-NC相对比,通过流式细胞术进一步检测甲状腺癌细胞系TPC-1细胞凋亡变化并与阴性对照sh-NC相对比,通过Transwell实验检测sh-NC组与sh-LUCAT组细胞的侵袭能力,通过划痕实验检测sh-NC组与sh-LUCAT组细胞的迁移能力,进一步通过Western blot检测sh-NC组与sh-LUCAT组上皮间质转化相关蛋白的变化。进一步进行实验数据的总结,得出实验结论。沈阳医学院附属医院伦理委员会批准上述研究方案,并且所有患者表示知情同意并签字。新鲜样本由康成生物公司进行测序和数据分析。结果1.二代测序结果发现多种LncRNA在PTC组织、PTC患者血液中出现差异表达:lncRNA-OG,lncRNA-w42,lncRNA-HEIH,lncRNA-H19,lncRNA-LUCAT。且在PTC组织和PTC患者血液均表达上调;只有lncRNA-LUCAT在PTC组织和PTC患者血液均是相对表达水平最高的（P＜0.05）。2.与人类甲状腺上皮细胞系Nthy-ori3-1相比,在三个不同的PTC细胞系中观察到lncRNA-LUCAT表达升高（P＜0.05）。3.与sh-NC组相比,sh-LUCAT组中的TPC-1细胞在24h,48h和72h三个时间点的细胞增殖情况均出现显著降低。不同组的细胞培养48h后,与sh-NC组相比,sh-LUCAT组中的细胞克隆数量显著减少（P＜0.05）。4.与对照组相比,沉默LncRNA-LUCAT后细胞凋亡率升高（P＜0.05）。5.sh-NC转染组24小时后发生侵袭的细胞数为243.33±24.12,而sh-LUCAT组细胞发生侵袭的细胞数量为143.34±15.44,差异具有统计学意义（P＜0.05）。6.sh-NC组与sh-LUCAT组的修复率分别为45.125±6.543和35.332±4.453,差异有统计学意义（P＜0.05）。7.与sh-NC组相比,转染sh-LUCAT组细胞中E-cadherin和N-cadherin表达升高,波形蛋白Vimentin表达减少（P＜0.05）。结论1.lncRNA-LUCAT在甲状腺癌患者癌组织和血液中均表达上调;2.敲减lncRNA-LUCAT能够抑制甲状腺乳头状癌细胞的增殖增殖、迁移和侵袭以及上皮-间质转化,促进甲状腺癌细胞凋亡。3.lncRNA-LUCAT在甲状腺乳头状癌中发挥致癌基因的作用,可能成为甲状腺乳头状癌的精确诊断的潜在生物标志物和治疗的靶标。
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