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油菜蜂花粉是蜜蜂将采集的油菜雄性生殖小孢子、花蜜及自身分泌物经过特殊加工而成的不规则的扁圆形颗粒物,富含蛋白质、核酸、糖类、脂类、维生素、矿物质以及多种生理活性物质,具有极高的营养价值。可逆糖化多肽(reversibly glycosylated polypeptide, RGP)是一种水溶性蛋白,存在于单子叶植物和双子叶植物中。已有的研究证实,RGP与植物多糖的合成以及细胞壁的形成密切相关。我们研究发现油菜蜂花中RGP含量很高,但其相关性质及生物学功能尚未见报道。为此,本文以油菜蜂花粉为原料,通过对油菜蜂花粉水溶性蛋白的分析,开拓性地对RGP进行分离、纯化、鉴定及组织定位,结果如下：(1)采用饱和硫酸铵分级沉淀法对油菜蜂花粉中的水溶性蛋白进行逐级提取,结果表明,当硫酸铵饱和度为200～40%、40～60%和60～80%时得到的水溶性蛋白量较高,分别为736.70、748.05和516.88μg/g;聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析结果表明,油菜蜂花粉中水溶性蛋白种类较多,其分子量主要集中在25～90 kDa之间。(2)采用DEAE～Sepharose Fast Flow阴离子交换柱以及Sepharose CL-6B凝胶过滤柱对透析后的硫酸铵饱和度为20～40%区段的水溶性蛋白进行分离纯化,纯化得到了两种高纯度的水溶性蛋白,SDS-PAGE图谱表明,其分子量分别为-40 kDa和～42kDa；将两种蛋白的SDS谱带扣点分别进行MALDI-tof-MS和LC-MS鉴定,所得数据通过MASCOT软件进行同源性比对,结果表明,两种蛋白质均为可逆糖化多肽,分别命名为油菜蜂花粉可逆糖化多肽1 (BnRGP1)和可逆糖化多肽2 (BnRGP2)。(3)着重BnRGP2进行相关性质研究,MALDI-tof-MS结果表明BnRGP2的精确分子量为42388 Da;等电点聚焦电泳结果表明BnRGP2的pI为5.46,为酸性蛋白质；高效液相色谱对RGP2氨基酸组成分析结果表明BnRGP2含量17种氨基酸,其中天冬氨酸含量最高,达71.56 mg/g；同时,通过免疫组化对BnRGP2进行组织定位,TEM电镜结果表明BnRGP2主要分布于花粉外壁的基柱部位和药室内壁处,亚细胞定位结果表明BnRGP2主要存在于细胞质中,并分布在高尔基体周围。