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本研究采用环氧氯丙烷活化琼脂糖凝胶4FF (Sepharose 4FF),通过ε-氨基己酸(AHA)修饰,获得免疫亲和基质,并与抗苏丹红Ⅰ单克隆抗体偶联,制备苏丹红Ⅰ免疫亲和柱,同时建立了免疫亲和柱联高效液相色谱法(Immunoaffinity column-High Performance Liquid Chromatography, IAC-HPLC)检测辣椒粉加标样品中的苏丹红Ⅰ。研究结果如下：1琼脂糖凝胶Sepharose 4FF的活化与修饰采用环氧氯丙烷法活化Sepharose 4FF,对Sepharose 4FF预处理、反应温度、反应时间、DMSO百分比、NaOH浓度和环氧氯丙烷百分比分别进行优化,确定了40℃反应2 h 20 min、46.8% DMSO、30% ECH和NaOH初始浓度为8 mol/L、终浓度为0.8 mol/L为最佳反应条件,在此条件下,环氧基活化率能到达80μmol/g。采用ε-氨基己酸为间隔臂修饰环氧氯丙烷法活化的Sepharose 4FF (Sepharose 4FF-epoxy),确定了以pH 8.30.1 mol/L NaHCO3含0.5 mol/L NaCl、25℃偶联8.5 h为最佳反应条件。2 Sepharose 4FF-epoxy-s-氨基己酸与配体的偶联反应将Sepharose 4FF-epoxy-s-氨基己酸与氨基化苏丹红反应,对反应条件EDAC浓度、反应温度和时间进行优化,确定了以EDAC浓度为19mg/mL、27℃、16h为最佳反应条件。氨基与羧基偶联过程中,考虑到温度过高会造成抗体活性的破坏,在4℃条件下,进一步优化,确定了以EDAC浓度为19mg/mL、反应72h为最佳反应条件。3抗SudanⅠ单克隆抗体免疫亲和柱的制备将辛酸-硫酸铵法纯化的抗SudanⅠ单克隆抗体与ε-氨基己酸修饰的琼脂糖凝胶Sepharose 4FF偶联。采用HPLC方法检测免疫亲和柱的柱容量。抗Sudan I单克隆抗体免疫亲和柱以0.3 g带羧基的琼脂糖凝胶4FF与1 mg苏丹红Ⅰ单抗偶联,柱容量为1.6μg。4建立IAC-HPLC检测苏丹红Ⅰ将苏丹红Ⅰ样品过免疫亲和柱,乙腈洗脱后以高效液相色谱法(HPLC)检测,紫外检测波长为478 nm,流动相为0.1%甲酸水溶液-乙腈-0.1%甲酸乙腈溶液-丙酮(体积比为21.25：3.75：60：15)。对免疫亲和柱的操作条件即上样缓冲液、上样方式、洗脱液体积进行优化,并对免疫亲和柱的稳定性进行了测定。结果显示以20%乙腈-PBS、上样一次、3 mL乙腈洗脱液为最佳条件。在加标实验中,辣椒粉以0.25～3mg/kg水平添加SudanⅠ标准品,平均回收率为44.52%-77.40%,相对标准偏差为4.6%-8.3%,最低检出限为125ng/mL。