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HER2为表皮生长因子受体超家族成员,是人类肿瘤中发生改变频率最高的原癌基因之一。其基因表达水平和基因拷贝数目在几种人类肿瘤细胞中都有显著升高,特别是在乳腺癌、卵巢癌和胃癌中升高更为显著。HER2在乳腺癌和许多其他癌症中的过表达伴随着很多预后不良反应如肿瘤进展快,易复发,这使得HER2成为理想的抗肿瘤免疫治疗的靶标。抗HER2抗体能够通过干扰HER2这种肿瘤生长过程中的重要媒介诱导抗肿瘤效应,也可以作为靶向分子用来转运治疗药物至HER2过表达的肿瘤细胞表面,这构成了抗体依赖性疗法的基础。
1.抗HER2单域抗体目前,已开发了多种靶向 HER2抗体药物,包括抗HER2 单链抗体scFv。scFv 抗原识别特异性强,易于基因工程大量生产,但是其相对复杂的分子结构,仍然具有免疫原性,结构的不稳定性,和构建方法的繁琐大大限制了其在医疗领域的应用。单域抗体也称纳米抗体,其轻链缺失,仅由两条重链构成。相比而言,分子结构更简单,尺寸更小,更稳定,亲和力更高,免疫原性更低,更易表达纯化。
纳米抗体的上述优势使其在肿瘤靶向性治疗方面具有更大的应用前景。应用噬菌体筛选技术,我们从单域抗体文库中筛选出高亲和力的抗HER2单域抗体,并测定其基因序列。
2.纳米抗体五聚物Vero毒素,或志贺氏杆菌样毒素,是一种AB5型毒素,其中B亚基能自组装成五聚体,是一种良好的自组装单位。将单域抗体与大肠杆菌Vero毒素B亚基(VTB)融合,VTB-sdAb自组装,从而构建出同形五聚物即纳米抗体五聚物。纳米抗体五聚物大大提高了与特异性抗原的亲和力。我们利用分子克隆技术将筛选出的抗HER2单域抗体基因装入带有VTB结构域的特异性表达载体,构建出重组抗HER2纳米抗体五聚物表达系统。该系统能够在大肠杆菌中高效,可溶性表达抗HER2五聚体,通过细胞学免疫荧光实验和免疫组化检测,证明抗HER2纳米抗体五聚物具有极强的亲和特异性和亲和强度。