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目的:在通过对实验高压电烧伤动物模型的肠系膜、肠黏膜、肾皮质、肝脏、胃黏膜、深筋膜、软脑膜等多部位脏器的大体形态及微循环变化的观察,前期的试验图像、数据表明高压电不仅引起局部性的皮肤及深部组织烧伤,而且还引起全身多脏器的损伤。微循环的变化主要表现为凝血机制的改变,局部组织广泛的微血栓的形成。已有实验证明血小板活化因子(platelet activating factor,PAF)、血栓素A2(TXA2)和前列环素(PGI2)在早期促使局部血液趋于高凝状态发挥着重要作用。对于本实验的设计旨在通过对于高压电烧伤大鼠模型血浆中PAF、TXA2和PGI2的动态变化的观察,进一步探讨高压电烧伤微循环障碍特别是促凝的机制,及己酮可可碱(pentoxifylline,PTX)对上述三种因子表达的干预,为临床治疗高压电烧伤提供试验依据。
方法:
1.实验动物分组:健康成年雄性SD大鼠(河北医科大学动物实验中心提供,合格证编号805927)180只,随机分为高压电烧伤实验组(简称实验组)、高压电烧伤己酮可可碱(PTX)治疗组(简称治疗组)与假高压电烧伤组(简称对照组),每组各60只。高压电烧伤实验组、PTX治疗组和对照组又分别分于电击前(T0)；电击即刻(15min内)(T1)；电击后1h(T2)；2h(T3)；4h(T4)；8h(T5),共6个时相进行有关指标观察与测定,各时相均为10只大鼠。各组分笼饲养并分别编号。
2.实验前准备:实验前各组大鼠分别称重,按大鼠编号记录在册。大鼠置于(20±2)℃室温,湿度在(40±5)％Rk{的实验室中,禁食,自由饮水,过夜。按需配制实验药品,低温冰箱保存。
3.高压电烧伤模型复制:正确连接变压器及调压器后待用,用1％戊巴比妥钠麻醉大鼠(按40mg/kg给药),待麻醉成功后给予大鼠左上肢、右下肢及胸部备皮。备皮后将大鼠四肢伸展呈仰卧放置于高压输出电路之间的绝缘台上,分别将1cm×1cm圆形铜制电极片固定于大鼠的左上肢、右下肢脱毛区,左上肢为入口,右下肢为出口。接通电源后调整变压器于电压2 KV,分别给予实验组和治疗组大鼠持续时间为3s的电击,对照组相同程序固定后给予假电,其他条件各组均相同。实验组与治疗组均为Ⅲ°。电击伤创面,治疗组在电击后即刻采用腹腔注射方式给予1％PTX(按50mg/kg即5ml/kg给药),对照组及电击组电击即刻腹腔注射给予5ml/kg生理盐水。
4.标本采集与保存:将复制成功高压电烧伤大鼠模型按不同时相麻醉后开胸,直视下用5ml注射器通过心脏穿刺采血,收集4ml全血于普通塑料试管中,静置30min后以3000转/分离心,用1次性吸管吸取上清液,放置于Eppendorf管中于-70℃冰箱中保存待用。
5.指标检测:采用ELISA双夹心抗体法分别检测电烧伤早期不同时相血浆中PAF、TXA2和PGl2动态变化情况,及PTX对三项指标的干预效果。
6.实验数据处理:所有计量资料均用SPSS16.0统计软件进行统计学分析处理,实验数据均以均数土标准差((X)±s)表示,采用完全随机设计的两因素析因设计的方差分析(ANOVA),对实验数据进行分析比较,以P<0.05为有显著性检验水准。
结果:血浆中PAF、TXA2、PGI2和TXA2/PGI2的变化:
1.对照组组内比较无显著性差异(P>0.05)。
2.高压电烧伤后早期实验组不同时相血浆PAF、TXA2和PGI2水平均高于对照组及电击前血浆PAF、TXA2和PGI2水平(检验水准<0.05)；三项指标表达水平均是从电击即刻开始增高；其中PAF表达水平呈持续性升高,于4h左右达高峰后缓慢下降,但仍高于对照组；TXA2从电击即刻呈显著升高趋势,也于4h左右到高峰后下降但仍高于对照组(P<0.05)；PGI2浓度在电击即刻后平缓上升并且持续到电击后8h,呈现全时段升高趋势；TXA2相对PGI2增加幅度较大,致使电击后4hTXA2/PGI2达到高峰,随着血浆PGI2含量增加,TXA2含量的降低,TXA2/PGI2有所降低,到伤后8h仍高于对照组(P<0.05)。
3.高压电烧伤后早期PTX治疗组不同时相血浆PAF、TXA2和PGI2高于对照组及电击前血浆PAF、TXA2和PGI2的水平(P<0.05),但同一时相较电击组血浆PAF、TXA2有不同程度下降(P<0.05),PGI2的水平有所升鬲。
结论:
1.实验高压电烧伤早期大鼠血浆PAF、TXA2和PGI2表达均有不同程度升高,通过强烈收缩微小血管,使微循环阻力升高；诱导血小板聚集黏附,血液黏性增高；血栓形成与堵塞等造成微循环障碍。
2.高压电烧伤早期PTX治疗组PAF、TXA2和PGI2与实验组比较明显降低,但仍高与对照组,PTX治疗可以不同程度降低PAF、TXA2及升高PGI2减轻血液趋于高凝状态,从而缓解微循环紊乱。因而,PTX可能对高压电伤烧早期的机体微循环障碍的治疗具有积极的临床意义。