第1章急性缺血性脑卒中患者血清miR-126及SPRED1/VEGFA表达水平与中医分型之间关系的研究目的:明确急性缺血性脑卒中的不同中医证型与血清miR-126及SPRED1/VEGFA的相关性,分析急性缺血性卒中不同中医证型变化的可能机理,为急性缺血性卒中的中西医诊断、分型及预后提供早期的客观依据。方法:临床上收集符合标准的急性缺血性卒中患者(108例)作为实验组,非卒中健康者(30例)为对照组,中医辨证后检测血清miR-126、SPRED1及VEGFA指标,完成NISHH量表及Barthel指数评分,探讨血清miR-126、SPRED1及VEGFA与急性脑卒中中医辨证分型的关系。结果:1、急性缺血性脑卒中患者血清miR-126表达水平较对照组显著降低,风痰阻络证其下降较其他三个证型有显著差异(p<0.05)。2、实验组血清SPRED1、VEGFA表达水平分别较对照组均显著升高,四个证型中血清SPRED1在痰热腑实证中升高较其他证型有显著差异,而血清VEGFA则是在风痰阻络证中有显著差异(p<0.05)。结语:急性缺血性脑卒中患者血清miR-126及VEGFA均在风痰阻络证中表达最为显著,因此,血清miR-126联合VEGFA可作为急性缺血性脑卒中风痰阻络证的客观指标。第2章短暂性全脑和局灶性脑缺血再灌注损伤后海马和半暗带区miR-126的动态变化目的:观察miR-126在全脑和局灶性脑缺血后不同脑组织中随急性缺血再灌注时间的变化,并明确急性缺血性脑卒中后miR-126通过SPRED1/VEGFA/Raf-1信号通路调控神经损伤的作用机制。方法:选择ICR小鼠通过大脑中动脉栓塞(MCAO)建立局灶性脑缺血模型,沙鼠通过结扎双侧颈总动脉构建短暂性全脑缺血模型。TTC染色评估脑梗死体积,Longa评分评估神经功能障碍程度。利用免疫组化染色观察缺血再灌注后沙鼠海马CA1区GFAP,Iba-1和NeuN免疫活性变化,甲酚紫染色用于评估神经元损伤水平。用PC12细胞构建氧糖剥夺再灌注(OGD/R)模型,CCK-8法检测细胞活性,通过siRNA低表达质粒构建体外miR-126、SPRED1及VEGFA低表达模型。通过RT-PCR确定体内外模型中缺血再灌注后miR-126-3p和miR-126-5p在RNA水平的表达,同时利用蛋白印迹法观察SPRED1/VEGFA/Raf-1通路蛋白的变化。结果:1、急性缺血性脑卒中后小鼠和沙鼠中miR-126-3p及miR-126-5p表达水平降低,其与PC12细胞OGD/R后的结果一致。2、急性缺血性脑卒中后神经元损伤逐渐加重,从而激活了神经胶质细胞。3、对miR-126-3p的抑制加剧了 OGD/R诱导的细胞损伤和细胞活力的降低。4、抑制miR-126-3p后,OGD/R中SPRED1和VEGFA表达水平升高,而p-Raf-1表达降低。此外,基于对miR-126-3p抑制的干预,siSPRED1干预后p-Raf-1的表达显著增加,而siVEGFA干预后p-Raf-1的表达无统计学意义。结论:在全脑和局灶性脑缺血损伤后,miR-126的表达显著减少与急性缺血再灌注后神经元损伤密切相关。另外,抑制miR-126的表达加剧了神经细胞损伤,这与激活SPRED1及抑制Raf-1密切相关。这项研究表明,miR-126可能是将来在急性缺血性脑卒中患者中进行药物遗传学治疗的潜在靶标。