背景与目的近年来的研究显示,长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）在剂量补偿效应、表观遗传调控、细胞周期调控、细胞分化、细胞凋亡、衰老及肿瘤发生、发展调控方面发挥重要作用[1,2]。lncRNA具有类型多、数量多和作用机制多等特点[3]。随着高通量转录组测序技术的不断发展,越来越多的lncRNA被陆续发现,但目前大部分lncRNA确切生物学功能及作用机制并不清楚[4]。因此,从众多长链非编码RNA中筛选出有功能的lncRNA并对其调控细胞生物学行为的分子机制进行研究显得十分必要[7]。本研究目的在于初步筛选并鉴定差异表达lncRNA,并进一步探讨其调控非小细胞肺癌增殖、侵袭转移的可能分子机制。方法（1）从基因表达综合数据库（GEO;Http://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo）中通过SAGE标签查找并筛选出癌旁肺组织与肺癌组织中呈现差异表达lncRNA序列标签,并根据差异表达程度（癌旁肺组织与肺癌组织差异表达相差≥1.5倍）和分子特征选择其中新近鉴定的lncRNA作为候选重点研究对象。（2）采用Real-time PCR的方法在正常支气管上皮细胞（BEAS-2B）和非小细胞肺癌细胞株（NL9980,L9981,A549,H1299,H446等）中进差异表达验证,并根据差异表达水平挑选lncRNA LINC00996作为后续重点研究对象。（3）在30对NSCLC患者的肿瘤组织和远癌肺组织中采用real-time PCR方法检测LINC00996的表达水平,在组织水平上验证LINC00996是否存在NSCLC患者肿瘤组织与癌旁肺组织差异表达情况。（4）根据LINC00996全长序列,由上海吉玛公司设计并合成3条针对目的序列的小干扰RNA（siRNA）,采用Lipofect-2000脂质体转染法分别转染3条LINC00996特异siRNA（si-868）、无关的siRNA（si-NC）及针对GAPDH的siRNA（si-GAPDH）。（5）采用流式细胞术检测转染针对LINC00996的小干扰RNA si-868后非小细胞肺癌细胞株周期变化。（6）应用细胞计数仪对转染si-868、si-nc及空白对照组的非小细胞肺癌细胞株H1299进行细胞增殖能力检测,绘制生长曲线,判断细胞增殖能力变化。（7）通过克隆形成实验,比较转染前后细胞增殖能力变化。（8）采用划痕和transwell试验检测转染前后非小细胞肺癌细胞株迁移能力变化。（9）采用western-blot检测下调LINC00996表达前后相关细胞周期通路蛋白表达变化。结果（1）通过SAGE标签查找并筛选出新近鉴定的43个差异表达（肺癌组织与癌旁肺组织表达相差≥1.5倍）的lncRNA。（2）采用real-time PCR的方法进行验证,并根据相应lncRNA在细胞中的表达水平和差异程度挑选LINC00996作为后期重点研究对象。（3）30例配对标本中肿瘤组织LINC00996表达上调者17例,占56.7%;表达下调者3例,占10.0%,上调表达者显著高于下调表达这（P<0.05）。（4）合成小干扰RNA并成功下调长链非编码RNA LINC00996在非小细胞肺癌细胞株H1299中的表达;（5）下调LINC00996表达后,H1299细胞增殖能力降低（P<0.05）、G0/G1期细胞比例上升（P<0.05）、细胞凋亡及衰老比例升高（P<0.05）、迁移能力下降（P<0.05）;（6）下调长链非编码RNA LINC00996后磷酸化Rb蛋白p-Rb表达量降低,而总Rb蛋白无明显变化,P15蛋白表达量升高,c-myc表达降低,符合细胞增殖信号通路被抑后相关蛋白的变化趋势。结论（1）长链非编码RNA在肺癌细胞与正常支气管上皮细胞,以及肺癌组织与癌旁肺组织间存在明显的差异表达;（2）长链非编码RNA LINC00996在多种肺癌细胞株及肺癌组织中呈现高表达,但在正常支气管上皮细胞及癌旁肺组织中呈现低表达;（3）长链非编码RNA LINC00996可能参与调控肺癌细胞增殖、迁移、凋亡、细胞周期及细胞衰老的等细胞生物学过程。（4）LINC00996参与调控细胞增殖可能是通过与磷酸化Rb、P15及c-myc等蛋白信号通路相互作用实现的。