人角质细胞生长因子转化胡萝卜和水稻初探

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利用植物作为生物反应器生产具有医用价值的蛋白或者抗体是植物基因工程的一个研究热点。同大肠杆菌等微生物相比,植物作为生物反应器具有翻译后正确的修饰、加工,生产成本低,不需要纯化,可以直接食用等优点。角质细胞生长因子(Keratinocytegrowthfactor,KGF)蛋白由194个氨基酸组成,其基因含有三个外显子,两个内含子,是一种促细胞分裂因子。KGF在表皮细胞的生长和更新过程中起重要作用,能加快膀胱、肾和肠的损伤修复和促人角膜上皮细胞生长。另外,KGF在放、化疗带来的损伤修复方面也起着重要作用。有关KGF的原核表达,已有相当多的报道,而利用植物为反应器表达KGF的研究还较为少见。因此,利用水稻和胡萝卜等植物为反应器生产KGF蛋白将是一种新的尝试。本实验以人DNA为模板,PCR扩增获得角质细胞生长因子外显子2和外显子3;合成单链的寡核苷酸,经链延伸和PCR扩增从而获得外显子1。应用延伸PCR将三个外显子连接得KGF编码序列。并连接CaMV35S启动子和NOS终止子后克隆至植物表达质粒pBI1301。 在植物转化中,我们利用农杆菌介导的转化方法将人KGF转到水稻和胡萝卜中。PCR及斑点杂交检测证明了KGF基因已经整合到植株的基因组中;反转录PCR及westernbotting检测证明了KGF基因在转化植株中表达。本实验中,获得了人KGF的转基因植物,为将来KGF转基因植物的应用和开发奠定了工作基础。
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