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溺海肺损伤包括肺的结构损伤和功能降低。海水淹溺后,引起死亡的主要原因是海水淹溺肺水肿（pulmonary edema of sea water drowning, PE-SWD）。肺微血管内皮细胞（microvascular endothelial cells, MVEC）是位于循环血液与组织液之间的单层扁平上皮细胞,溺海肺损伤时,肺微血管内皮细胞的结构遭到破坏,使其对液体及溶质的通透性增加,造成渗透性肺水肿。因此降低微血管内皮细胞的渗透性是治疗溺海肺损伤的重要环节。Βeta-肾上腺素受体（Beta-adrenergic receptorβ-AR）无论是在病理情况下还是生理情况下,对微血管内皮细胞功能和渗透性的调节都起着十分重要的作用。β-肾上腺素受体各个亚型,包括β1-AR,β2-AR和β3-AR,在脉管系统均发挥一定的作用。许多研究证明,受体激动剂激活β2-AR后可在一定程度上减轻有致炎因子所导致的内皮细胞渗透性的增高,但改变程度有限,临床效果并不理想。有研究表明这可能与β2-AR在细胞膜的表达水平有关,具体机制不明。最近的研究表明Rab1可调节β-AR在细胞膜上的表达,为临床药物干预提供了新的靶点和策略。β-AR的胞内运输对发挥其正常功能是十分重要的。β-AR在细胞表面上表达的水平是受体内化、循环和降解三方面平衡调节的结果。以往的研究也往往集中在受体内化、循环和降解这三个方面,而受体从内质网到细胞膜的运输路径以及这些路径对受体功能的影响却知之甚少。事实上,受体在细胞器间的运输是受Rab蛋白调节的。Rab蛋白是Ras超家族的一个成员,目前在人类基因组中已证实的有60多种。几乎所有的Rab蛋白都参与了细胞中囊泡的形成、对接或融合,也参与了细胞的胞吞和胞吐过程。内皮细胞主要表达Rab 1–9, 11, 13, 14, 15, 18, 22和30。Rab 1存在于内质网和高尔基体,主要参与蛋白从内质网到高尔基体的顺向调节。目前已经发现在HEK293T细胞和心肌细胞中,Rab1参于了G蛋白偶联受体从内质网向高尔基体运输的调节,表明Rab1功能的改变可能影响内皮细胞表面β-AR的表达,继而影响细胞的渗透性。本实验试通过转染野生型Rab1、Rab1突变体及Rab1小片段RNA观察β-AR在大鼠肺微血管内皮细胞表面的表达和功能,同时探讨Rab 1对大鼠肺微血管内皮细胞渗透性的影响。研究内容:1.采用外周肺组织贴块法培养大鼠RPMVECs,对培养细胞进行CD34、植物凝集素BSI、Ⅷ因子相关抗原免疫细胞化学染色鉴定,通过光镜和透射电镜观察细胞形态和超微结构。2.运用配体饱和测定法测定大鼠RPMVECs海水和LPS处理后、慢病毒包装的Rab1WT转染后β-AR在胞膜上的表达。3.运用荧光显微镜检测慢病毒包装的Rab1WT、Rab1N124I和Rab1siRNA转染PMVEC后β-AR在细胞膜和内质网的分布状况。4.运用Western Blot检测慢病毒包装的Rab1WT和Rab1N124I转染PMVEC后pERK1/2的表达情况。5.运用ELISA方法检测RPMVECs用海水、LPS处理以及转染Rab1WT后对牛血清白蛋白（BSA）的透过情况。结果:1.组织块法培养大鼠RPMVECs的综合鉴定结果显示:组织块源于外周肺组织,Ⅷ因子相关抗原和CD34免疫荧光化学染色阳性,植物凝集素BSI结合试验阳性,透射电镜细胞表面有较多突起,胞浆中有较多吞饮小泡。2.海水及LPS处理后β-AR在胞膜上的表达明显降低,转染Rab1WT后可恢复β-AR在胞膜上的表达。3.转染Rab1WT后β-AR主要在胞膜上表达,转染Rab1N124I和Rab1siRNA后β-AR主要积聚在内质网。4.转染Rab1WT后pERK1/2的表达明显升高,转染Rab1N124I后Rab1WT后pERK1/2的表达明显降低。5.海水及LPS处理后对RPMVECs牛血清白蛋白（BSA）的通透性增加,转染Rab1WT后可显著降低RPMVECs的渗透性。结论:1. Rab1蛋白可调节β2-AR在RPMVECs细胞膜上的表达和细胞内的分布。2. Rab1蛋白可调节β2-AR介导的ERK1/2信号转导途径。3. Rab1蛋白通过促进β2-AR在RPMVECs细胞膜上的表达调节RPMVECs的渗透性。