精原干细胞可以维持自身的增殖以及分化为不同的生殖细胞，是自然状态下出生后个体内在整个生命期间能够进行自增殖并能将基因传递至子代的惟一成体干细胞。精原干细胞的体外培养是研究生精过程及其影响因素的重要手段，优化精原细胞的培养条件、规范细胞培养程序、阐明精原细胞在体外培养中细胞数量、细胞增殖、细胞凋亡等生物学特性的变化规律，是进一步深入研究的重要基础。但是精原干细胞在体外存活和增殖受到许多因素的影响，体外培养的条件以及某些基因方面的研究还不是十分明了，因此，有必要对精原干细胞的体外培养体条件以及其对增殖、凋亡相关基因表达的影响作一下研究。　　 本实验采用组合酶消化、选择性贴壁的方法，分离得到了纯度较高的小鼠睾丸精原干细胞；并设计了条件培养基、GDNF处理培养基以及对照培养基三种体系培养精原细胞。在一定的时间内培养精原细胞，应用CASY细胞活力分析仪、激光共聚焦显微镜等技术检测了精原干细胞数量及活性，精原干细胞标志物c-kit受体蛋白，并辅助以碱性磷酸酶染色鉴定；检测细胞增殖核抗原（PCNA）和Bcl-2家族蛋白Bax（Homo sapiens Bcl-2 associated protein）、Bcl-2(B-cell leulcemia-lymphoma 2)的表达变化。　　 实验结果显示：　　 1.应用组合酶消化、选择性贴壁分离纯化的方法，分离得到的小鼠精原细胞的纯度达到70％以上。　　 2.应用细胞活力分析仪测定细胞培养过程的数量及活性，表明细胞在体外培养时期，细胞的增殖高峰分别在培养的第三天以及第七天，其中条件培养基组细胞增殖数量高于GDNF处理组；在培养的第七天，GDNF处理组与对照组相差不大。　　 3.应用碱性磷酸酶染色及c-kit受体蛋白检测方法鉴定了培养的精原干细胞。　　 4.激光共聚焦显微镜检测结果显示，在培养的第一天，条件培养基组Bax、Bcl-2、PCNA的表达与GDNF处理组相差不大；条件培养基组和GDNF处理组与对照组相比，Bax的信号较弱，Bcl-2的信号较强；PCNA信号较强。说明在培养的初期条件培养基组与GDNF处理组差别不大，培养状态均好于对照组。　　 5.在培养的第三天，条件培养基与GDNF处理组Bax的表达低于对照组，条件培养基与GDNF处理组差别不大；条件培养基组Bcl-2的表达高于GDNF处理组，GDNF处理组高于对照组；条件培养基组PCNA的表达高于高于GDNF处理组，GDNF处理组高于对照组。说明在增殖的第一个高峰，条件培养基组培养状态好于GDNF处理组与对照组，GDNF处理组好于对照组。　　 6.在培养的第五天，条件培养基组、GDNF处理组、对照组Bax的表达差异不大，保持在较高的水平；条件培养基组Bcl-2的表达高于GDNF处理组，GDNF处理组高于对照组；条件培养基组的PCNA的表达高于GDNF处理组和对照组，GDNF处理组和对照组差异不大。说明在培养的第五天，三组细胞均处于高凋亡率时期，细胞数量处于最低，但条件培养基组增殖情况好于GDNF处理组与对照组。　　 7.在培养的第七天，条件培养基组Bax的表达低于GDNF处理组与对照组，条件培养基组与GDNF处理组表达差异不大；条件培养基组Bcl-2的表达高于GDNF处理组和对照组，GDNF处理组与对照组差异不大；条件培养基组PCNA的表达高于GDNF处理组与对照组，GDNF处理组与对照组差异不大。说明在第二个增殖高峰，条件培养基组仍保持较高的增殖水平，且凋亡率不高；而GDNF处理组和对照组增增水平相近，且处于较高的凋亡水平。　　 以上结果表明：在一定时期内体外培养精原干细胞，条件培养基能明显促进细胞增殖，抑制细胞的凋亡；GDNF在体外一定的培养前期明显促进细胞的增殖，但在培养末期对细胞的增殖、凋亡的影响并不十分明显。