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背景:人腺病毒(Human adenovirus, HAdV)是一种无包膜的线状双链DNA病毒,目前已发现90个基因型。腺病毒55型(HAdV55型)是从2006年陕西省岐山县爆发的疫情中首次分离获得,后经全基因组测序鉴定,认为系由HAdV11型与HAdV14型在六邻体基因上发生了重组所致。既往认为,HAdV是引起免疫缺陷人群和幼儿肺炎的常见致命性病原体,但近年来HAdV55型在免疫功能健全的成年患者中,引起致命性肺炎的病例受到越来越多的关注。HAdV引起呼吸道感染的主要表现为发热、咳嗽、咳痰、咽痛、颈部淋巴结肿大,咽部充血或咽后壁淋巴滤泡增生,半数以上患者可出现肺部影像学改变。成人患者中可引起外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)亚群紊乱,进一步导致适应性免疫功能紊乱。2016年10月-11月和2018年5月我院先后处置陕西某部训练单位和某大学两起HAdV55型疫情,2017年先后处置我校H1N1流感(简称甲流)疫情。我们分析了HAdV55型肺炎和上呼吸道感染(简称上感)患者临床表现及外周血PBMC亚群特征,并进一步运用microarray和luminex分析上述患者全基因表达谱和血浆炎性因子表达差异,以深入研究HAdV55型的临床特点及其机体对感染的应答特征,为有效的治疗和预防腺病毒感染奠定理论基础。
目的:分析HAdV55型肺炎成年患者的临床特征及PBMC全基因表达,明确HAdV55型感染者应答特征。
方法:回顾性纳入2016年12月-2018年5月我院收治的132例成人HAdV55型感染患者,包括38例肺炎患者(肺炎组)和94例上呼吸道感染者(上感组)。分析两组患者临床及影像学特征;流式细胞仪分析其中31例肺炎和38例上感患者外周血PBMC亚群分布,设10例健康对照;进一步动态观察5例肺炎和3例上感患者外周血T淋巴细胞亚群变化。Microarry分析5例HAdV55型肺炎患者,5例HAdV55型上感患者,5例甲流肺炎患者和5例健康对照的PBMC全基因表达谱差异;Luminex分析并验证10例HAdV55型肺炎患者,10例HAdV55型上感患者,10例甲流肺炎患者,10例甲流上感患者和10例健康对照人群血浆中10种炎性因子的表达差异。
结果:与上感组比较,肺炎组患者更易出现咳痰(15/38,39.5%,χ2=4.599,P=0.032),外周血白细胞(t=-3.142,P=0.002)和中性粒细胞(t=-3.628,P=0.000)计数降低,淋巴细胞比例(t=1.606,P=0.003)和绝对计数(t=2.122,P=0.036)升高;胸部CT显示肺部病变主要集中于右肺(21/38,56%)。PBMC亚群分析显示,肺炎患者CD4+T细胞(t=2.957,P=0.006)、CD8+T细胞(t=6.360,P=0.000)、NK细胞(t=3.428,P=0.001)和B细胞(t=2.555,P=0.015)比例均明显高于健康对照,但与上感患者比较,差异无统计学意义(P>0.050)。T淋巴细胞亚群动态分析显示,5例肺炎患者第3病日CD3+T淋巴细胞计数降低,后逐渐升高,至第18病日恢复正常。对PBMC全基因谱分析表明:在GO分析的分子功能(Molecular Function,MF)部分,HAdV55型肺炎组患者上调的基因主要富集在蛋白质异源二聚反应活性和作用于DNA的催化活性(包括DNA复制、核酸转运和蛋白结合)方面,甲流患者上调的基因主要富集在模式识别受体活性和趋化因子受体结合等免疫细胞因子表达与结合方面;在生物过程(Biological Process,BP)部分,HAdV55型肺炎组患者上调的基因主要富集在核分裂等细胞复制周期方面,甲流患者上调的基因主要富集在免疫反应方面;在细胞组分(Cellular Component,CC)部分,HAdV55型肺炎组患者上调的基因主要富集在核内区域,甲流患者上调的基因主要富集在胞膜和囊泡区域;通过KEGG分析显示,上调基因HAdV55型肺炎主要富集在Cellcycle通路,甲流肺炎主要富集在NOD?likereceptorsignalingpathway通路。细胞因子检测分析显示:HAdV55型肺炎组、HAdV55型上感组分别与健康对照比较,无统计学差异(P>0.050);HAdV55型肺炎组外周血TNF-α表达低于HAdV55型上感组(Z=-2.747,P=0.006);HAdV55型肺炎组外周血IL-8和IL-27表达低于甲流肺炎组(Z=-2.306,P=0.021;Z=-2.886,P=0.004);甲流肺炎组外周血CCL-2、IL-8、IL-27、TNF-α、M-CSF表达高于健康对照组(依次为Z=-2.646,P=0.008;Z=-3.139,P=0.002;Z=-2.454,P=0.010;Z=-2.585,P=0.010;Z=-2.457,P=0.014);甲流肺炎组外周血CCL-2和IL-8表达高于甲流上感组(Z=-2.268,P=0.023;Z=-3.190,P=0.033),TNF-α低于甲流上感组(Z=-2.136,P=0.033)。
结论:HAdV55型成人肺炎患者咳痰较上感常见,右肺容易受累,更易出现宿主细胞免疫功能紊乱,动态监测PBMC亚群有助于评估病情。HAdV55型感染机体后主要引起PBMC的DNA复制,导致淋巴细胞增生,推测可能与机体细胞免疫途径防御病毒入侵有关。
目的:分析HAdV55型肺炎成年患者的临床特征及PBMC全基因表达,明确HAdV55型感染者应答特征。
方法:回顾性纳入2016年12月-2018年5月我院收治的132例成人HAdV55型感染患者,包括38例肺炎患者(肺炎组)和94例上呼吸道感染者(上感组)。分析两组患者临床及影像学特征;流式细胞仪分析其中31例肺炎和38例上感患者外周血PBMC亚群分布,设10例健康对照;进一步动态观察5例肺炎和3例上感患者外周血T淋巴细胞亚群变化。Microarry分析5例HAdV55型肺炎患者,5例HAdV55型上感患者,5例甲流肺炎患者和5例健康对照的PBMC全基因表达谱差异;Luminex分析并验证10例HAdV55型肺炎患者,10例HAdV55型上感患者,10例甲流肺炎患者,10例甲流上感患者和10例健康对照人群血浆中10种炎性因子的表达差异。
结果:与上感组比较,肺炎组患者更易出现咳痰(15/38,39.5%,χ2=4.599,P=0.032),外周血白细胞(t=-3.142,P=0.002)和中性粒细胞(t=-3.628,P=0.000)计数降低,淋巴细胞比例(t=1.606,P=0.003)和绝对计数(t=2.122,P=0.036)升高;胸部CT显示肺部病变主要集中于右肺(21/38,56%)。PBMC亚群分析显示,肺炎患者CD4+T细胞(t=2.957,P=0.006)、CD8+T细胞(t=6.360,P=0.000)、NK细胞(t=3.428,P=0.001)和B细胞(t=2.555,P=0.015)比例均明显高于健康对照,但与上感患者比较,差异无统计学意义(P>0.050)。T淋巴细胞亚群动态分析显示,5例肺炎患者第3病日CD3+T淋巴细胞计数降低,后逐渐升高,至第18病日恢复正常。对PBMC全基因谱分析表明:在GO分析的分子功能(Molecular Function,MF)部分,HAdV55型肺炎组患者上调的基因主要富集在蛋白质异源二聚反应活性和作用于DNA的催化活性(包括DNA复制、核酸转运和蛋白结合)方面,甲流患者上调的基因主要富集在模式识别受体活性和趋化因子受体结合等免疫细胞因子表达与结合方面;在生物过程(Biological Process,BP)部分,HAdV55型肺炎组患者上调的基因主要富集在核分裂等细胞复制周期方面,甲流患者上调的基因主要富集在免疫反应方面;在细胞组分(Cellular Component,CC)部分,HAdV55型肺炎组患者上调的基因主要富集在核内区域,甲流患者上调的基因主要富集在胞膜和囊泡区域;通过KEGG分析显示,上调基因HAdV55型肺炎主要富集在Cellcycle通路,甲流肺炎主要富集在NOD?likereceptorsignalingpathway通路。细胞因子检测分析显示:HAdV55型肺炎组、HAdV55型上感组分别与健康对照比较,无统计学差异(P>0.050);HAdV55型肺炎组外周血TNF-α表达低于HAdV55型上感组(Z=-2.747,P=0.006);HAdV55型肺炎组外周血IL-8和IL-27表达低于甲流肺炎组(Z=-2.306,P=0.021;Z=-2.886,P=0.004);甲流肺炎组外周血CCL-2、IL-8、IL-27、TNF-α、M-CSF表达高于健康对照组(依次为Z=-2.646,P=0.008;Z=-3.139,P=0.002;Z=-2.454,P=0.010;Z=-2.585,P=0.010;Z=-2.457,P=0.014);甲流肺炎组外周血CCL-2和IL-8表达高于甲流上感组(Z=-2.268,P=0.023;Z=-3.190,P=0.033),TNF-α低于甲流上感组(Z=-2.136,P=0.033)。
结论:HAdV55型成人肺炎患者咳痰较上感常见,右肺容易受累,更易出现宿主细胞免疫功能紊乱,动态监测PBMC亚群有助于评估病情。HAdV55型感染机体后主要引起PBMC的DNA复制,导致淋巴细胞增生,推测可能与机体细胞免疫途径防御病毒入侵有关。