大西洋鲑荧光假单胞菌感染症的病原学及病理学研究

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2008年10月以来,陆续在四川都江堰、彭山等地发生了一种严重危害大西洋鲑健康养殖的慢性溃疡病,该病具有发病缓慢,死亡率高等特点,以体表出现圆形、椭圆形或不规则的溃疡为病变特征,已给当地的大西洋鲑养殖带来严重的经济损失。本试验对其病原学与病理学等进行了研究,其目的在于搞清该病的病原与致病机理,为养殖生产中有效地诊断和防治该病提供科学依据。经常规细菌分离,从自然发生体表溃疡的大西洋鲑肌肉溃疡周围肌肉和肝脏处分离到一相同菌株命名为DF081019。经人工感染实验确定为大西洋鲑溃疡症的病原。对该菌的形态、生理生化特征检测表明,该菌为革兰氏阴性短杆菌,大多数菌落单独存在,少数菌落成对出现。菌落1~1.7mm,表面光滑,凸起有光泽,在LB培养基上呈半透明生长,无鞭毛,无荚膜。该菌葡萄糖氧化发酵阳性,氧化酶检测阳性,0%NaCL生长。能利用甘露醇,不具运动性,能发酵麦芽糖,葡萄糖产酸阳性,精氨酸双水解酶阳性,苯丙氨酸脱氨酶阴性。对分离株的药物敏感性实验结果表明,该菌对强力霉素,四环素,氟苯尼考,庆大霉素敏感,对阿奇霉素,克拉霉素,先锋霉素Ⅱ,丁胺卡那霉素较为敏感,对美满霉素,链霉素,万古霉素,氨苄青霉素,磺胺异恶唑,新霉素,卡那霉素,青霉素,羧苄青霉素不敏感。应用细菌通用引物,扩增出DF081019菌株的16S rRNA的互补DNA片段,该片段大小为1490个bp。将获得的序列在RDP数据库进行在线Classifer。结果表明,该菌属于假单胞菌属的细菌,再将获得的序列与GenBank中已报道的假单胞菌16S rDNA序列用DNAstar软件进行多序列比对分析和构建系统发育树。结果证实,DF081019分离株与其他荧光假单胞菌形成一个簇群,同源性高达99.3%以上,最终鉴定其为荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)。同时,通过肌肉注射、创伤感染和浸泡试验检测该菌对大西洋鲑的毒力,结果表明,通过肌肉注射、创伤感染两种方式出现与自然发病鱼相似的体表溃疡症状,并引起死亡的LDS0值为3.2×105.42cfu/ml;对其病变的病理学研究表明病灶处骨骼肌间质水肿,出血,间隙增宽,肌纤维变性,肌浆凝固,呈严重红染,部分肌细胞肌肉浆溶解呈蜂窝状,间质炎性细胞浸润;肌浆溶解严重的溶解成空泡状,仅残存少量的肌膜,部分区域肌纤维断裂;肝细胞肿胀,空泡变性,部分肝细胞溶解坏死,细胞核溶解消失;肝血窦水肿扩张,有蛋白样物质渗出;狄氏间隙扩张;有淤血出现;脾脏出血,淋巴细胞大量消失,被红细胞占据,大量含铁血黄素沉着;溃疡处皮肤表皮层和真皮层水肿;肠黏膜坏死,肠绒毛断裂、脱落于肠腔;脑基质疏松,水肿。
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