甘肃陇南地区华山松溃疡病病原菌的鉴定

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华山松(Pinus armandii Franch.)是我国广泛分布与栽植的本土树种。近年来在华山松主要分布区的甘肃陇南地区发生一种新的溃疡病,枝干被感染后在表皮层产生黑褐色病斑,病情加重后组织失水,表面凹陷产生纵裂伴有流脂,后期导致植株针叶稀疏、枯黄,严重时整株枯死。为明确引起华山松溃疡病的发生原因、发生规律以及病原菌的类型、生物学特性,本研究于2018年-2019年对我国甘肃陇南地区发生的华山松溃疡病进行了实地调查,结合传统形态学鉴定和分子系统发育学研究技术,鉴定了来自感病华山松不同分离部位的真菌类型,比较了不同菌株的致病性,并明确了致病菌的相关生物学特性。主要研究结果如下:(1)甘肃陇南地区华山松溃疡病的病情调查结果显示:该病害在甘肃陇南地区发生严重,主要为害10~30年长势较弱的华山松,发病林地的病株率为68.83%,平均病情指数为30.17。据观察该病的症状表现为:侵入初期,降低寄主活力,进而在表皮层产生圆形、椭圆形的变色病斑,并逐渐向周围扩展,发病后期寄主组织失水,表面凹陷,伴随病菌子实体的出现。通过解剖病害组织,可发现内皮层和木质部表层均呈褐色。(2)从健康和发病的华山松树干分离与纯化,共获得97株菌株。对上述菌株采用ITS、TEF及RPB2等基因进行系统发育学分析,结合形态学特征鉴定为9个种。其中Neocosmospora silvicola为优势菌种,分离频率最高为14.17%。在科的分类水平上,以丛赤壳科(Nectriaceae)为优势菌群,占总菌株数量的44.33%。(3)选择从子实体处、病健交界处、健康处以及病斑处分离获得的8株丛赤壳科真菌作为接种供试菌株,通过接种离体华山松枝条、活体华山松苗木及新鲜柠檬,测定不同菌株的致病性。结果显示Neocosmospora silvicola的2株菌株在以上三种试验中均有致病性,且编号为PCD1的菌株致病性显著较高,其它6株菌株均未表现致病性。结合系统发育树及培养特性可知,Neocosmospora silvicola为华山松溃疡病病原菌,该菌是中国新记录种。同时,本文也是Neocosmospora silvicola引起松科植物溃疡病的首次报道。(4)通过测定病原菌菌株PCD1在不同营养条件、温度、光照、p H、氮源与碳源条件下菌丝的生长速率,结果表明菌株PCD1在PDA培养基上菌丝生长最快,在OA培养上菌丝生长的最慢;最适温度区间为20℃~30℃,在10℃低温条件下也能缓慢生长;黑暗条件下菌丝生长最佳,12h光照交替光照条件下生长最为缓慢;在p H4~11之间均能生长,最适p H为6~9;菌株在以淀粉作为替换碳源的查氏培养基上菌丝的生长速率最快,因此淀粉是病原菌的最适碳源;以硝酸钠作为替换氮源的查氏培养基上菌丝的生长速率最快,故硝酸钠为其最适氮源。
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