现在养殖企业的饲料中脂肪的含量越来越高,动物机体不能分泌足量的胆汁来分解脂肪,因此胆汁酸作为饲料添加剂孕育而生。据报道哺乳动物卵泡液中含有丰富的胆汁酸,提示饲料中胆汁酸的添加可能会影响到母畜的生殖机能。本研究以水牛为研究对象,首先分析了水牛卵泡中胆汁酸的来源;其次采用靶向代谢组学方法检测了健康卵泡（HF）和闭锁卵泡（AF）中胆汁酸的亚种,和各种胆汁酸的含量;最后研究差异胆汁酸对卵泡颗粒细胞凋亡、增殖及激素分泌的影响。本研究将为探索胆汁酸参与水牛卵泡闭锁提供新观点,也为饲料中添加胆汁酸提供理论依据。研究取得了如下结果:1、探讨了水牛卵泡液中胆汁酸的来源分别通过免疫组化和WB验证胆汁酸的合成酶基因CYP7A1、CYP27A1和胆汁酸的转运体基因NCTP、ASBT是否在卵巢组织表达,结果显示胆汁酸的合成酶基因在卵巢组织不表达,而胆汁酸的转运体基因在卵巢组织上表达;分别在卵泡内膜细胞和卵泡颗粒细胞培养液中添加胆固醇,检测细胞中胆固醇含量和培养液中胆汁酸的含量的变化,结果显示添加胆固醇后细胞中胆固醇含量显著增加（P＜0.05）,但培养液中胆汁酸的含量没有变化,提示卵泡细胞不能合成胆汁酸。2、检测了健康卵泡（HF）和闭锁卵泡（AF）中胆汁酸的亚型和含量根据卵泡的外部特征和内部形态区分HF和AF,并通过检测雌二醇和孕激素的含量以及凋亡相关基因的相对表达量来验证卵泡分类的准确性,结果表明卵泡分类准确;靶向代谢组检测结果显示,各待测物的标准曲线线性良好,R2均大于0.999。根据标准曲线量化HF和AF卵泡液中的胆汁酸。在HF和AF中胆汁酸的种类一致,CA和GCA均是主要的胆汁酸亚型,但各胆汁酸的浓度不同。差异显著的胆汁酸有13种,整体来看,AF中结合型胆汁酸的含量明显高于HF,游离型胆汁酸的含量明显低于HF;HF中的总胆汁酸含量显著高于AF。3、探讨了甘氨脱氧胆酸（GDCA）对体外培养的水牛颗粒细胞功能的影响GDCA是HF和AF中差异最大的结合型胆汁酸,分别向体外培养的颗粒细胞中添加0μM、200μM、300μM、400μM的GDCA,检测颗粒细胞状态的变化。结果表明添加GDCA后,水牛颗粒细胞的凋亡率显著上升（P＜0.01）;E2的分泌显著降低（P＜0.01）;P4的分泌显著降低（P＜0.01）;而EDU阳性率没有变化。检测凋亡、增殖和类固醇合成相关基因的相对表达量,发现GDCA促进了水牛颗粒细胞中凋亡相关基因caspase3、BAX、P53的表达,抑制抗凋亡基因Bcl2的表达,并抑制类固醇相关基因CYP11A1、CYP19A1的表达,而对细胞增殖相关基因PCNA、Cyclind1没有影响。由此,本研究初步表明了水牛卵泡液中的胆汁酸来源于血液的运输,卵泡细胞自身不能合成胆汁酸;HF和AF中胆汁酸亚型存在差异,AF中结合型胆汁酸增多,游离型胆汁酸降低,其中差异结合型胆汁酸GDCA可以通过促进卵泡颗粒细胞凋亡,减少类固醇激素的分泌,从而调控颗粒细胞的功能,参与卵泡闭锁。