AP-2是一个功能重要的转录因子家族，在哺乳动物的胚胎发育过程中，其表达受到严格的时空调控，参与多种组织和器官的细胞分化和形态发生，如神经脊，颅面部，四肢，躯干部，心脏和肾脏的发育。已经被克隆和研究的AP-2家族成员有AP-2α，AP-2β，AP-2γ，AP-2δ与AP-2ε，都能以同源或异源二聚体的形式结合于保守的DNA序列5′-GCCNNNGGC-3′。AP-2α是AP-2家族中最早被克隆和研究最多的一个成员。其功能不仅表现为胚胎发育中的重要调控子，还通过转录调控下游靶基因参与多个生理过程的调节，包括细胞生长，分化，癌变和凋亡等。作为一个多功能的调控因子，AP-2α有多个协同作用的蛋白伙伴。为了找到更多的与AP-2α相互作用的蛋白因子，我们用全长的AP-2α作为诱饵蛋白筛选了HeLa cDNA文库。得到了一个阳性克隆为人类的TESTIN(TES)基因，另一个为actinin(ACTN)基因。两者都是细胞骨架相关的蛋白，都能与actin相互作用。其中TES具有PET-LIM结构，在其C端有先后排列的3个LIM domain，可能与癌症的抑制相关。在本论文中，我们重点研究了TES与AP-2α．的相互作用以及TES的功能。我们表达纯化了全长和多种分段的AP-2α与TES蛋白，并制备了相应的抗血清。AP-2α与TES蛋白的相互作用通过体外pull-down与细胞裂解液中的免疫共沉淀实验得到了进一步验证。我们用体外pull-down实验将两者的相互作用定位于两个蛋白的C端。另外，我们还检测了TES蛋白的分子内相互作用，发现其N端通过C端的LIM3在体外相互结合。在荧光素酶报告系统中，我们的结果表明TES的过表达能够抑制AP-2α对ERBB2启动子的转录活性，而且除了全长，TES的C端与N端似乎都有一定的作用。在细胞免疫荧光化学分析中，我们发现本底TES蛋白定位有多种模式，特别是能位于内质网和细胞核中。我们的结果显示TES与AP-2α的表达在细胞核中有部分重叠区域。有趣的是，我们还发现TES过表达引起本底的AP-2α表达水平降低。而对TES进行RNA干扰可以大大提高本底ERBB2基因的转录水平。总的来说，我们的研究表明AP-2α与TES存在着体外相互作用，在细胞内可能处于同一复合体中，两者的相互作用可能对AP-2α介导的ERBB2转录激活起到抑制。同时我们的结果也为抑制癌症的功能提供了新的机制-通过抑制AP-2α的转录活性而起作用。而TES蛋白新的细胞内定位表明其功能不仅与细胞骨架相关，还在细胞核等区域内有一定的作用，AP-2α就是TES在细胞核中第一个相互作用的协助伙伴。TES在细胞核中的具体功能将有待进一步深入研究和发现。