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目的：通过减少内源性一氧化氮(nitric oxide，NO)或者增加外源性NO的方式，探讨NO对体外培养状态下的新生大鼠神经干细胞/前体细胞(neural stem cells/neuralprecursors，NSCs/NPs)分化的作用。
方法：
1．采用常规方法分离新生大鼠脑室下带(subventricular zone，SVZ)组织，进行NSCs/NPs体外培养、扩增，并添加5．溴．2-脱氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2-deoxyuridine，BrdU)标记增殖的细胞。
2．用N-硝基-L精氨酸甲酯(N-nitro-L-arginine methylester，L-NAME)作为神经元型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase，nNOS)抑制剂，观察内源性NO的减少对NSCs/NPs分化的影响。
3．用二乙烯三胺/一氧化氮聚合物(diethylenetriamine/NO，DETA/NO)作为外源性NO供体，观察外源性NO的增加对NSCs/NPs分化的影响。
4．用免疫细胞化学方法，观察NSCs/NPs标志物——巢蛋白(neuroepthelial stemcell protein，nestin)、神经元标志物——βⅢ型微管蛋白(β-Ⅲ-tubulin，Tuj-1)和星型胶质细胞标志物——胶质原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein，GFAP)的表达；观察BrdU和nNOS表达情况。
5．用Greiss还原法检测培养液中总NO的浓度。
结果：
1．从SVZ分离的细胞，经过5-7天体外培养，可形成神经球。原代或次代培养的神经球均为nestin阳性，同时可检测到BrdU阳性的细胞。在不施加任何处理因素的情况下，原代或次代神经球均可分化出Tuj-1阳性的神经元和GFAP阳性的星形胶质细胞。
2．在体外培养的NSCs/NPs中加入L-NAME 5天后，100μM、150μM、200μML-NAME实验组培养液中NO浓度分别为28.4±3.0μM、27.9±2.7μM、25.2±4.4μM，较对照组(34.1±2.7μM)减少(P<0.05)相应实验组分化的神经元数分别为34.5±5.2％、33.8±5.7％、32.6±7.2％，较对照组(40.8±6.7％)减少(P<0.05)；150μM、200μM实验组分化的星型胶质细胞数分别为27.5±4.1％、27.0±7.5％，较对照组(36.2±4.3％)也减少(P<0.05)。另外，100μM、150μM、200μM L-NAME实验组分化细胞表达的nNOS阳性率分别为19.0±5.3％、18.0±3.0％、17.8±4.9％，也较对照组(25.9±6.4％)减少(P<0.05)。
3.在体外培养的NSCs/NPs加入DETA/NO 5天后，40μM、50μM、60μMDETA/NO实验组培养液中分别释放出62.0±6.4μM、64.8±15.7μM、68.5±11.6μM的NO，较对照组(25.6 ±16.4μM)显著增加(P<0.01)；相应实验组分化的神经元数分别高达53.1±4.7％、54.1±6.9％、63.8±9.5％，而分化的星型胶质细胞数分别只有36.6±6.3％、38.2±6.7％、41±10.5％。
结论：
NO对体外培养的NSCs/NPs的作用主要是促使其分化，特别是诱导其向神经元方向分化。