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目的:人呼吸道合胞病毒(Human Respiratory Syncytial Virus,RSV)是造成世界范围内婴幼儿严重下呼吸道感染最重要的病毒病原,同时也可导致老年人、免疫功能低下者严重的呼吸道感染。病毒感染机体后的免疫保护机制尚未明确,也无特异性防治方法。融合糖蛋白(fusion glycoprotein,F)与黏附糖蛋白(attachment glycoprotein,G)为RSV的两个中和抗原,都可诱导机体产生中和抗体。RSV疫苗及以预防为目的的单克隆抗体的研发常以这两个蛋白为重要的靶蛋白。在前期研究中,本课题组已采用间接ELISA法筛选出针对RSV F蛋白线性表位205-222位氨基酸的单克隆抗体。本研究尝试进一步利用活体骨髓瘤细胞与杂交瘤技术,采用间接免疫荧光分析法(indirect immunoflurescence assay,IFA)筛选出更多可识别RSV的单克隆抗体,并对其体外性质进行鉴定,以期为RSV的被动免疫治疗以及临床诊断奠定基础。 方法:以RSV通过滴鼻途径免疫小鼠,同时,采用实体瘤技术体内制备骨髓瘤细胞。取免疫后小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合,利用IFA方法筛选经有限稀释法亚克隆获得的可稳定分泌抗RSV单克隆抗体(Monoclonal antibody,McAb)的杂交瘤细胞株。通过间接ELISA和Western blot等方法初步分析McAb对RSV蛋白的特异性结合能力,通过免疫酶法(Immunoenzyme,IM)中和保护实验和融合抑制实验分析McAb体外保护作用。 结果:获得四株稳定分泌抗RSV单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别为2A7、3E10、1F10及3G4,经间接ELISA以及Western blot初步鉴定,获得的四株单克隆抗体可特异性识别RSV蛋白,McAbs2A7和3E10可分别识别F蛋白二聚体和单体,McAbs1F10和3G4可识别G蛋白。其中McAbs2A7与1F10可以在体外抑制RSV对HEp-2细胞的感染,具有中和活性,同时具有融合抑制活性。 结论:利用IFA法成功筛选了能特异性识别RSV的四种单克隆抗体,初步鉴定显示两种单抗可分别识别F蛋白二聚体和单体,另两种单抗可识别G蛋白。IE法蚀斑减少实验显示两种单抗在体外具有中和活性和融合抑制活性,这些工作初步表明获得的单抗对RSV感染具有一定的预防作用,为进一步开展系统、深入的研究奠定了基础。