【摘 要】
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兴安杜鹃（Rhododendron dauricum L.）是杜鹃花科杜鹃属植物,具有止咳祛痰的功效,在中国的东北部、日本、朝鲜和俄罗斯等地广泛分布。目前,有关兴安杜鹃活性成分的研究多集中于黄酮类、萜类、香豆素类、酚酸类等小分子化合物,而兴安杜鹃多糖作为其大分子活性成分之一,相关研究较少。因此,本论文以兴安杜鹃的干燥叶为原料,经提取、纯化分离得到精制兴安杜鹃多糖组分,并对其各个组分的乙酰化结构修饰
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兴安杜鹃（Rhododendron dauricum L.）是杜鹃花科杜鹃属植物,具有止咳祛痰的功效,在中国的东北部、日本、朝鲜和俄罗斯等地广泛分布。目前,有关兴安杜鹃活性成分的研究多集中于黄酮类、萜类、香豆素类、酚酸类等小分子化合物,而兴安杜鹃多糖作为其大分子活性成分之一,相关研究较少。因此,本论文以兴安杜鹃的干燥叶为原料,经提取、纯化分离得到精制兴安杜鹃多糖组分,并对其各个组分的乙酰化结构修饰、结构表征和抗氧化活性进行研究。采用水提醇沉法制备兴安杜鹃粗多糖（Rhododendron dauricum polysaccharides,RDP）,采用静态吸附法对比筛选得到D101树脂更适合于纯化兴安杜鹃多糖;结合层次分析法和响应面实验对兴安杜鹃粗多糖的纯化工艺进行优化,得到兴安杜鹃多糖脱色纯化的最佳条件为:多糖浓度7.88 mg/m L,脱色温度52.72℃,脱色时间70.12 min,液固比6.06 m L/g,预测脱色效果综合评分为3.74。在此条件下,实际脱色效果综合评分为3.55±0.15（n=3）;进一步,采用DEAE-52纤维素阴离子交换层析法对纯化后兴安杜鹃粗多糖分离,得到两个组分即兴安杜鹃多糖组分-1（RDP-1）和兴安杜鹃多糖组分-2（RDP-2）。采用苯酚-硫酸法测定两种兴安杜鹃多糖组分（RDP-1和RDP-2）的多糖含量,得出RDP-1和RDP-2的多糖含量分别为93.12±3.34%和90.67±3.84%。采用一系列现代分析仪器（傅里叶红外光谱、高效液相色谱、高效凝胶渗透色谱、气质联用、核磁共振波谱）研究兴安杜鹃多糖的结构,分析表明两种多糖组分均具有多糖的特征基团,且由葡萄糖、甘露糖、半乳糖和阿拉伯糖构成的杂多糖,仅单糖含量比例存在一定差别;RDP-1和RDP-2的分子量分别为1.0948×10~4k Da和1.1899×10~5k Da,且具有三股螺旋构象。甲基化分析及核磁波谱测定结果表明两种多糖组分均由→5)-Araf-（1→,→6）-Glcp-（1→,→2,4）-Manp-(1→,Glcp-（1→和→6）-Galp-(1→五种糖苷键以不同的连接序列组成。在单因素实验的基础上,采用响应面法对兴安杜鹃粗多糖的修饰工艺进行优化,得到兴安杜鹃多糖乙酰化修饰工艺的最佳条件为:反应时间3.15 h,反应温度49.98℃,液固比15.96 m L/g,理论上乙酰基取代度为0.472。在此最佳结构修饰工艺条件下,乙酰化修饰后的粗多糖（Ac RDP）和兴安杜鹃多糖组分（Ac RDP-1,Ac RDP-2）乙酰基取代度分别为0.455、0.419和0.445;傅里叶红外光谱测定结果显示Ac RDP-1和Ac RDP-2在1251.89 cm-1处特征峰显著增强,表明成功完成乙酰化修饰。Ac RDP-1和Ac RDP-2单糖含量发生改变,分子量降低为9.3525×10~3k Da、4.7016×10~3k Da,三股螺旋结构被破坏。抗氧化活性评价结果表明,乙酰化前后的兴安杜鹃多糖组分对DPPH、OH和ABTS三种自由基有不同程度的清除效果。通过One-Way方差分析对比,Ac RDP、Ac RDP-1、Ac RDP-2对ABTS、OH自由基的清除能力显著高于RDP、RDP-1、RDP-2,表明乙酰化结构修饰可以促进兴安杜鹃多糖发挥抗氧化作用。综上,本文对兴安杜鹃多糖的脱色工艺、结构表征、乙酰化结构修饰以及体外抗氧化活性进行系统研究,为兴安杜鹃多糖的开发利用及其工业化生产奠定理论基础。
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