论文部分内容阅读
骨髓源性细胞(BMDCs)包含有多种类型的骨髓干细胞。粒细胞集落刺激因子(G-CSF)可以动员BMDCs进入血液循环,并且BMDCs可以向其它类型的组织细胞分化。本实验拟用G-CSF动员BMDCs入血,并观察其对博莱霉素诱导的肺损伤的修复作用和机制。第一部分实验小鼠的骨髓重建目的用绿色荧光蛋白(GFP)标记BMDCs,为后续实验中BMDCs在体内的示踪研究做准备。方法20只C57BL/6J小鼠随机分为2组,每组10只,A组为移植组(全身照射+骨髓移植);B组为对照组(全身照射)。两组分别给予致死剂量照射后,A组接受GFP转基因小鼠的骨髓移植,B组不予移植。观察指标:(1).存活和体重变化情况;(2).外周血白细胞数量;(3).实验第28天时骨髓细胞中GFP表达情况。结果(1).对照组小鼠在照射后体重明显下降,并在照射后11天内陆续死亡;移植组小鼠体重在照射后一周内出现轻微下降而后逐渐恢复正常,仅有2只小鼠在11天内死亡;(2).对照组小鼠外周血白细胞在第5天时降为零,移植组小鼠外周血白细胞数量在照射后第5天明显下降,但在28天时恢复至正常水平。(3).实验第28天时移植组存活小鼠的骨髓细胞经流式细胞检测GFP阳性比例与GFP转基因小鼠相当。结论骨髓移植后小鼠存活率可达80%,重建后的骨髓细胞带有GFP标记,可用于后续实验。第二部分骨髓重建后小鼠自体BMDCs动员对博莱霉素所致肺损伤的影响目的观察G-CSF动员自体BMDCs入血,以及对博莱霉素诱导的小鼠肺损伤的修复作用。方法60只骨髓重建后的小鼠随机分为两组,每组各30只,A组为动员组(博莱霉素+G-CSF);B组为对照组(博莱霉素+生理盐水)。每组再各分为3个亚组,分别在实验第3、7和14天处死取材。观察项目包括:(1).肺组织病变肉眼下大体观察;(2).肺组织病理切片在光学显微镜下观察;(3).Masson三联染色观察肺组织内胶原沉积;(4).免疫组化方法检测肺组织内细胞因子表达,包括:转化生长因子-β1(TGF-β1)、干扰素-γ(IFN-γ)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和金属蛋白酶组织抑制物-1(TIMP-1);(5).肺组织内羟脯氨酸含量的测定; (6).肺组织内GFP阳性细胞的表达情况。结果(1).两组小鼠的肺组织在肉眼观察下无明显差异;(2).肺组织病理切片在光学显微镜下观察,A组小鼠在第7天时炎症程度明显轻于B组,差异有统计学意义(p<0.05)。在第3和第14天时差异不明显;(3).肺组织Masson染色结果显示,A组小鼠在第3和第7天时肺内胶原沉积明显低于B组,差异有统计学意义(p<0.05)。在第14天时差异不明显;(4).A组小鼠肺组织内TGF-β1的表达在第3和第7天时明显低于B组,差异有统计学意义(p<0.05);(5).A组小鼠肺组织内IFN-γ的表达在第3天时明显低于B组,差异有统计学意义(p<0.05); (6).A组小鼠肺组织内MMP-9的表达在第7和第14天时明显低于B组,差异有统计学意义(p<0.05);(7).两组小鼠肺组织内TIMP-1的表达在各时间点均无明显差异;(8).A组小鼠肺组织内羟脯氨酸的含量在第7天时明显低于B组,差异有统计学意义(p<0.05);(9).流式细胞仪检测显示,A组小鼠肺组织内GFP阳性细胞的比例在第7天时最高,而且与B组小鼠相比差异有统计学意义(p<0.05); (10).A组小鼠在第3天和第7天时,肺组织冰冻切片内均可观察到绿色荧光细胞存在。B组在实验观察的各时间点均未观察到有明显的绿色荧光细胞存在。结论G-CSF动员BMDCs对博莱霉素所致的肺损伤有一定的保护作用,可能与肺内有一定数量的BMDCs聚集和下调肺内致纤维化因子相关。第三部分非骨髓重建小鼠自体BMDCs动员对博莱霉素所致肺损伤的影响目的观察粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员自体BMDCs对博莱霉素所致的小鼠肺损伤的修复作用及机制探讨。方法75只C57BL/6J小鼠随机分为三组, C组为动员组,n=30,(博莱霉素+G-CSF);D组为对照组,n=30,(博莱霉素+生理盐水);N组为正常组,n=15,(生理盐水代替博莱霉素)。每组再各分为3个亚组,分别在实验第3、7和14天处死取材。观察项目包括:(1).肺组织病变肉眼下大体观察;(2).肺组织病理切片在光学显微镜下观察;(3).Masson三联染色观察肺组织内胶原沉积;(4).免疫组化方法检测肺组织内细胞因子表达;(5).肺组织内羟脯氨酸含量的测定; (6).肺通透指数(LPI):支气管肺泡灌洗液(BALF)蛋白含量/血清蛋白含量。另将20只C57BL/6J小鼠随机分为两组,动员组(E组)10只,(博莱霉素+G-CSF);对照组(F组) 10只,(博莱霉素+生理盐水)。两组不设终点,观察小鼠的存活时间。结果(1).C组和D组小鼠的肺组织在肉眼观察下无明显差异;(2).肺组织病理切片在光学显微镜下观察,C组小鼠在第7天时炎症程度明显轻于D组(p<0.05);(3).肺组织Masson染色结果显示,C组小鼠在第7天时肺内胶原沉积明显低于D组(p<0.05);(4).C组小鼠肺组织内TGF-β1的表达在第3、7和14天时明显低于D组(p<0.05);(5).C组小鼠肺组织内IFN-γ的表达在第3和第7天时明显低于D组(p<0.05);(6).C组小鼠肺组织内MMP-9的表达在第7天时明显低于D组(p<0.05);(7). C组和D组小鼠肺组织内TIMP-1的表达在各时间点均无明显差异;(8).C组小鼠肺组织内羟脯氨酸的含量在第7天时明显低于D组(p<0.05);(9).C组小鼠肺通透指数在第3和第7天时与D组小鼠相比明显降低(p<0.05);(10).E组和F组小鼠的在存活时间上无明显差异。结论G-CSF动员BMDCs对博莱霉素所致肺损伤有一定的保护作用,但在存活时间上无显著影响。