基于核酸适配体的孕酮快速检测新方法研究

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孕酮是一种性激素,与女性的月经周期、怀孕和胚胎发育密切相关。孕酮对于人体来说是不可或缺的,而且孕酮浓度在人体的不同阶段是不断变化的。如果孕酮浓度低于正常水平,人们则需要服用孕酮补品。然而,当孕酮的浓度超过正常水平时,孕酮可能有毒甚至会有致癌的作用。因此,监测孕酮浓度并将其控制在正常的范围内是至关重要的。然而,生物基质中的孕酮检测非常具有挑战性,因为生物基质中的孕酮浓度大约在ng·m L-1水平,甚至更低。虽然现已开发出许多高灵敏度的孕酮检测方法,但是这些方法需要昂贵的设备且操作流程较复杂,或是特异性、准确性、可重复性较差。目前,适配体已经被应用于多种靶标的检测。本论文提出了三种适配体传感器,用于自来水、尿液和血清中的孕酮检测。因此,孕酮的检测方法需要有较高的灵敏度。主要研究内容如下:(1)基于核酸适配体的阳离子聚合物(PDDA)聚集纳米金比色法检测孕酮。本实验利用PDDA的特性,通过PDDA、适配体、Au NPs三者之间的相互作用,实现了孕酮的快速检测。本方法的检测限为4.0n M;孕酮浓度在4.0-200 n M范围内,与ΔA呈线性关系。在自来水、尿液和血清中的孕酮加标回收率在91.8-102.2%,92.4-97.4%和91.2-98.4%的范围内。此方法具有灵敏、快速、简便等优点,能够满足孕酮的检测需求。(2)基于核酸适配体的Na Cl高效聚集纳米金比色法检测孕酮。本实验通过Na Cl、适配体、Au NPs之间的相互作用来控制Au NPs的聚集,从而进行孕酮的检测。本方法的检测限为2.6 n M;孕酮浓度在2.6-800 n M范围内,与ΔA呈线性关系。在含有潜在干扰物的超纯水、自来水和尿液中的孕酮加标回收率分别在89.7-117.5%,84.4-115.0%和94.7-118.8%的范围内。此方法与方法一相比,特异性和灵敏度都有所增强。(3)基于核酸适配体的阳离子表面活性剂(CTAB)聚集纳米金比色法检测孕酮。本实验利用CTAB、适配体、Au NPs三者之间的相互作用,建立了能快速检测孕酮的适配体传感器。本方法的检测限为0.89n M;孕酮浓度在0.89-500 n M范围内,与ΔA呈线性关系。在自来水、尿液和血清中的孕酮加标回收率在89.7-117.5%,84.4-115.0%和94.7-118.8%的范围内。与前两种方法相比,该方法检测下限又进一步降低。
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