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核仁因子Def在真核生物中保守，是核糖体小亚基加工复合体的组分，与U3snoRNA及核仁蛋白Mpp10和Sas10互作，参与核糖体RNA的加工;另外，在人和斑马鱼中，Def与分别与半胱氨酸蛋白酶CAPN3和Capn3b互作，介导p53蛋白在核仁中降解。Def作为一个如此重要的多功能蛋白，蛋白的活性需要受到精细的调控，但目前却知之甚少。 本课题主要着眼于Def的翻译后修饰研究，利用遗传学，细胞生物学，生物化学和分子生物学的研究方法，旨在寻找调控Def-Capn3b降解途径的翻译后修饰位点。本研究首先通过碱性磷酸酶处理蛋白样品，结合蛋白免疫印迹的方法，发现Def蛋白存在磷酸化修饰，而且其中一部分磷酸化修饰，发生在具有介导p53降解功能的Def肽段上。接着，我们利用定点突变的方法，在这一重要的肽段上，找到了5个磷酸化修饰位点，分别为S50，S58，S62，S87和S92。之后通过构建并研究磷酸化位点突变的转基因斑马鱼，发现磷酸化修饰通过调节细胞周期从G1到S以及G2到M的进程，调节斑马鱼肝脏发育。更为重要的是，研究也发现磷酸化修饰是Def在核仁中介导p53降解所必需。本研究的成果，为Def-Capn3蛋白降解途径的信号通路研究，奠定了坚实的基础。 此外，本研究还发现DefN端具有的酸性氨基酸（E和D）富集的特性，导致其在SDS-PAGE上的分子量，比其理论分子量大13 kDa。通过分析Def来源的13个蛋白片段迁移速率与不同类型氨基酸比例之间的关系，我们发现蛋白分子量的差异与酸性氨基酸的比例，呈线性正相关:y=276.5x-31.33(x代表酸性氨基酸的比例，y代表每个氨基酸的平均ΔMW)。并且该方程成功地预测了其它13个酸性蛋白在SDS-PAGE上的分子量。该方程的建立，成功地解决了酸性氨基酸影响蛋白迁移速率这一问题。 综上所述，论文以解析Def-Capn3b蛋白降解途径为研究目的，着重开展Def蛋白的生化功能研究，发现Def磷酸化修饰调控细胞周期和p53降解，以及酸性氨基酸影响蛋白迁移速率的特性并建立了计算方程。