重组人血管内皮抑素对接种泡状棘球蚴沙鼠VEGF、CD34表达的影响

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目的研究重组人血管内皮抑素对接种泡状棘球蚴沙鼠血管内皮生长因子(VEGF)、微血管密度(MVD)-CD34表达的影响。方法将50只健康雌性长爪沙鼠随机分为5组:模型组(A组)、生理盐水对照组(B组)、小剂量恩度注射组(C组)、中等剂量恩度注射组(D组)、大剂量恩度注射组(E组),每组10只。采用开腹肝穿刺法接种磷酸缓冲盐溶液(PBS)处理的泡球蚴原头节混悬液建立肝泡球蚴动物模型,A组造模完成后不予任何处理,C、D、E组在造模30天后分别给与5mg/kg、10mg/kg、15mg/kg的恩度溶液200μL腹腔注射,1次/天,连用14天后停7天,21天为一个周期;B组在造模30天后腹腔注射等量生理盐水,方法同恩度组;用药3个疗程后动脉取血并解剖沙鼠,留取肝泡球蚴组织,称量囊湿重,以酶联免疫吸附法(Elisa)、苏木精—伊红(HE)染色、免疫组化及蛋白印迹(Western Blot)检测各组沙鼠肝泡状棘球蚴组织中VEGF、CD34的表达。结果不同剂量恩度组的泡球蚴组织湿重均下降,中等剂量、大剂量恩度组与模型组、生理盐水对照组之间囊湿重差异有统计学意义(P<0.05)。各组沙鼠血清中VEGF及CD34的表达量呈递减趋势:除模型组与生理盐水对照组、中等剂量与大剂量恩度组之间VEGF表达无显著性差异外(P>0.05),其他各组之间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05);血清中CD34表达量:中等剂量恩度组、大剂量恩度组分别与模型组、生理盐水对照组之间两两比较差异有统计学意义(P<0.05),其他各组之间两两比较差异无统计学意义(P>0.05)。各组沙鼠泡球蚴组织中均检测到VEGF和CD34的表达,阳性细胞呈黄色或棕褐色,主要定位于肝泡球蚴组织增殖浸润区的内皮细胞的细胞浆,也可见于细胞膜;中等剂量、大剂量恩度组VEGF免疫组化评分低于模型组、生理盐水对照组,差异有统计学意义(P<0.05),小剂量恩度组与模型组、生理盐水对照组无明显差异(P>0.05);泡球蚴组织中的MVD值结果显示:恩度各组较模型组、生理盐水组MVD值均下降,差异有统计学意义(P<0.05),恩度各组之间、模型组与生理盐水组之间差异无统计学意义(P>0.05)。蛋白印迹试验同样检测到VEGF、CD34蛋白含量有所下降:除模型组与生理盐水对照组、中等剂量与大剂量恩度组之间VEGF表达量差异无统计学意义外(P>0.05),其他各组之间均有显著性差异(P<0.05);CD34的蛋白表达量显示,中等剂量、大剂量恩度组分别与模型组、生理盐水对照组、小剂量恩度组之间两两比较差异有统计学意义(P<0.05),其他各组之间两两比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论重组人血管内皮抑素能够降低泡状棘球蚴模型沙鼠体内血管内皮生长因子的表达,降低微血管密度,在一定程度上抑制泡状棘球蚴的生长。
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