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目的:甲状腺癌是最常见的头颈部恶性肿瘤,其中甲状腺未分化癌（Anaplastic thyroid cancer,ATC）是所有甲状腺癌中恶性程度最高的病理类型,患者的中位生存时间仅3—6个月。ATC在全部甲状腺癌中所占比例不足2%,但却是甲状腺癌相关死亡的主要原因。目前对于甲状腺未分化癌尚无有效的治疗方案,常采用手术、放疗、化疗、靶向治疗等综合治疗。阿霉素（Adriamycin,ADR）作为治疗甲状腺未分化癌的一线用药,其较大的毒副作用尤其是心脏毒性制约着临床的应用,在治疗过程中这些毒副作用往往给患者带来较大的痛苦,因此找到一种能够减轻阿霉素心脏毒性的药物与其联合用于甲状腺未分化癌的治疗中,成为一种迫切的需求。小檗碱（Berberine,BBR）由于其具有的心脏保护作用近年越来越得到人们的关注,很多研究证实其也可在肿瘤的治疗中发挥作用。p66Shc蛋白在很多研究中被认为与多种肿瘤关系密切,其在甲状腺未分化癌中的作用尚未得到验证。本实验通过阿霉素与小檗碱联合应用于甲状腺未分化癌细胞株CAL-62,研究其对CAL-62细胞株增殖、迁移、凋亡、细胞周期及细胞内p66Shc蛋白表达的影响,为阿霉素与小檗碱联合应用于治疗甲状腺未分化癌提供实验理论依据。方法:1.应用CCK8法检测不同浓度阿霉素及小檗碱单独给药及两药联合用药对CAL-62细胞增殖能力的抑制作用。2.应用细胞划痕实验检测阿霉素及小檗碱对CAL-62细胞迁移能力的影响。3.应用流式细胞仪检测阿霉素及小檗碱对CAL-62细胞凋亡情况以及细胞周期变化的影响。4.应用Western blot检测阿霉素及小檗碱对CAL-62细胞内p66Shc蛋白以及凋亡相关蛋白Bax蛋白及Bcl-2蛋白表达情况的影响。结果:1.阿霉素与小檗碱对CAL-62细胞增殖能力的影响CCK8结果显示单独使用不同浓度阿霉素（0.05μmol/L、0.1μmol/L、0.2μmol/L）、不同浓度小檗碱（20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L）以及联合使用阿霉素及小檗碱（0.1μmol/L阿霉素+20μmol/L小檗碱、0.1μmol/L阿霉素+40μmol/L小檗碱、0.1μmol/L阿霉素+80μmol/L小檗碱）处理CAL-62细胞后,每组均对CAL-62细胞的增殖能力起到抑制作用,且均随着药物作用时间及给药浓度的增加,抑制作用也相应增加。在作用72h时,0.05μmol/L、0.1μmol/L、0.2μmol/L阿霉素组的抑制率分别为41.69%±3.25%、52.08%±3.318%、67.04%±2.46%,差异具有统计学意义（P＜0.05）。20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L小檗碱组的抑制率分别为47.5%±2.97%、56.64%±3.52%、70.34%±3.99%,差异具有统计学意义（P＜0.05）。0.1μmol/L阿霉素分别与20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L小檗碱合用的抑制率分别为58.96%±2.12%,69.03%±4.28%,79.58%±3.66%,差异具有统计学意义（P＜0.05）。两药合用后与单独应用相同浓度的阿霉素或小檗碱相比,对CAL-62细胞的抑制率增加,差异具有统计学意义（P＜0.05）。2.阿霉素及小檗碱对CAL-62细胞迁移能力的影响划痕实验显示阿霉素及小檗碱作用于CAL-62细胞24小时后,ADR组（阿霉素浓度为0.1μmol/L）及BBR组（小檗碱浓度为40μmol/L）细胞迁移率由Control组（对照组）的79.94%±4.03%分别下降为61.41%±5.24%及50.94%±3.89%,差异具有统计学意义（P＜0.01）,ADR+BBR组（0.1μmol/L阿霉素+40μmol/L小檗碱）细胞迁移率则下降为33.46%±3.25%,具有明显统计学差异（P＜0.0001）。3.阿霉素及小檗碱对CAL-62细胞凋亡情况以及细胞周期变化的影响流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,结合上述实验结果,将用药分为四组进行凋亡情况的检测,Control组（对照组）细胞凋亡率为6.41%±3.05%,ADR组（阿霉素浓度为0.1μmol/L）细胞凋亡率为29.71%±3.96%,BBR组（小檗碱浓度为40μmol/L）细胞凋亡率为32.77%±4.89%,ADR+BBR组（0.1μmol/L阿霉素+40μmol/L小檗碱）细胞凋亡率为52.07%±5.09%,各给药组与Control组相比差异具有统计学意义（P＜0.001）。ADR+BBR组与ADR组及BBR组相比,其差异具有统计学意义（P＜0.01）。细胞周期检测结果发现,与Control组（对照组）相比,ADR组（阿霉素浓度为0.1μmol/L）G0/G1期细胞比例减少,G2/M期细胞比例增多,BBR组（小檗碱浓度为40μmol/L）G0/G1期细胞比例减少,S期及G2/M期比例均增多,ADR+BBR组（0.1μmol/L阿霉素+40μmol/L小檗碱）G0/G1期及S期的细胞比例均显著减少,G2/M期细胞比例则显著增加。差异具有统计学意义（P＜0.05）。4.阿霉素及小檗碱对CAL-62细胞内蛋白表达的影响Western blot检测阿霉素及小檗碱处理72h后CAL-62细胞内p66Shc蛋白、Bax蛋白及Bcl-2蛋白的表达情况,与Control组（对照组）相比,ADR组（阿霉素浓度为0.1μmol/L）Bax蛋白表达量增多,差异具有统计学意义（P＜0.0001）,Bcl-2蛋白表达量减少,差异具有统计学意义（P＜0.001）;BBR组（小檗碱浓度为40μmol/L）p66Shc蛋白表达量增多,差异具有统计学意义（P＜0.001）,Bax蛋白表达量增多,差异具有统计学意义（P＜0.0001）;ADR+BBR组（0.1μmol/L阿霉素+40μmol/L小檗碱）p66Shc蛋白表达量增多,差异具有统计学意义（P＜0.0001）,Bax蛋白表达量增多,差异具有统计学意义（P＜0.001）,Bcl-2蛋白表达量减少,差异具有统计学意义（P＜0.001）。结论:1.阿霉素与小檗碱均可以通过抑制肿瘤细胞的增殖及迁移、促进凋亡、阻滞细胞周期而发挥抗肿瘤效果。2.阿霉素与小檗碱联合使用时,其抗肿瘤效果不会受到干扰,且效果强于两种药物单独使用,在减少阿霉素用量的情况下仍能取得相同的抗肿瘤效果。3.阿霉素与小檗碱联合使用后p66Shc蛋白表达量较单独使用小檗碱显著增加,明显促进甲状腺未分化癌细胞的凋亡,小檗碱促进阿霉素抗肿瘤作用可能是在p66Shc蛋白介导下实现的。