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目的:探讨蛋白激酶A(Protein kinase A,PKA)在神经病理性疼痛中的表达及其可能参与机制。方法:从GEO数据库下载神经病理性疼痛的表达谱数据集GSE24982,通过R软件limma包筛选差异表达基因(Differentially Expressed Genes,DEGs),并利用clusterProfile包对DEGs进行基因本体论和KEGG通路富集分析。使用STRING数据库构建蛋白质-蛋白质相互作用网络,Cytoscape软件的cytoHubba插件筛选hub基因。然后选取雄性SD大鼠,体重200-220g,采用坐骨神经分支选择性损伤(Spared Nerve Injury,SNI)方法制备大鼠神经病理性疼痛模型,使用Von Frey丝测定大鼠的机械性痛阈以鉴定模型是否成功。采用蛋白质印迹法检测关键基因、p-p38MAPK、p38MAPK、TNF-α、IL-1β、caspase-3、caspase-9、bax、bcl-2表达量;免疫荧光单染法显示关键基因的表达及定位;免疫荧光双染法显示关键基因与脊髓星形胶质细胞、小胶质细胞和神经元的共定位;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测TNF-α、IL-1β含量;原位末端标记法(TUNEL)检测脊髓细胞凋亡。大鼠鞘内分别注射PKA和p38MAPK抑制剂后,再次采用蛋白质印迹法检测关键基因、p-p38MAPK、p38MAPK、TNF-α、IL-1β、caspase-3、caspase-9、bax、bcl-2表达量;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测TNF-α、IL-1β含量;原位末端标记法(TUNEL)检测脊髓细胞凋亡。结果:本研究共筛选出449个DEGs和20个hub基因,其中PKA被鉴定为参与神经病理性疼痛的关键基因。SNI可诱导大鼠出现机械性痛阈下降(P<0.05),脊髓PKA表达量增加(P<0.05),p38MAPK通路激活(P<0.05),并增加TNF-α、IL-1β、caspase-3、caspase-9、bax、bcl-2蛋白表达(P<0.05)。免疫荧光单染显示脊髓PKA表达增加,且主要定位于SNI同侧脊髓背角;免疫荧光双染显示PKA与神经元、星形胶质细胞和小胶质细胞共定位;TUNEL双标染色表明凋亡细胞主要为神经元。鞘内注射PKA抑制剂不仅能缓解SNI大鼠机械性痛觉过敏(P<0.05),降低TNF-α、IL-1β、caspase-3、caspase-9、bax、bcl-2蛋白表达(P<0.05),还能够抑制p38MAPK通路激活(P<0.05)。然而,鞘内注射p38MAPK抑制剂虽能减弱大鼠机械性痛觉过敏(P<0.05),降低TNF-α、IL-1β、caspase-3、caspase-9、bax、bcl-2蛋白表达(P<0.05),但对PKA的表达无影响(P>0.05)。结论:PKA在SNI诱导的神经病理性疼痛大鼠脊髓中显著上调,参与神经病理性疼痛的诱导与维持。其机制可能是通过激活p38MAPK通路介导脊髓细胞凋亡来实现的。