【摘 要】
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目的:O-乙酰氨基葡萄糖（O-GlcNAc）修饰是一种对能量敏感的翻译后修饰,在内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase,eNOS）活性调节中起主要作用。细胞内环境中的各种理化因素保持相对稳定的状态才能维持细胞的正常功能。课题组前期发现低糖通过“AMPK-OGT”通路引起eNOS Thr866位点O-乙酰氨基葡萄糖修饰水平上调,从而增加eNOS活性。而
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目的:O-乙酰氨基葡萄糖（O-GlcNAc）修饰是一种对能量敏感的翻译后修饰,在内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase,eNOS）活性调节中起主要作用。细胞内环境中的各种理化因素保持相对稳定的状态才能维持细胞的正常功能。课题组前期发现低糖通过“AMPK-OGT”通路引起eNOS Thr866位点O-乙酰氨基葡萄糖修饰水平上调,从而增加eNOS活性。而细胞外渗透压的增加对血管内皮细胞有许多负面影响:促进水从细胞外流出,引发细胞收缩和细胞内脱水,增加氧化应激,影响蛋白质的结构和功能,特别是酶的活性,从而影响细胞骨架和细胞核的结构。本文将探究高渗环境对eNOS Thr866O-GlcNAc修饰的影响,并进一步在牛主动脉内皮细胞（Bovine aortic endothelial cells,BAECs）探究高渗对eNOS Thr866 O-GlcNAc修饰的机制。方法:1.细胞实验:理化因素（高渗、热应激、过氧化氢、缺氧、酒精中毒、酸中毒）处理HEK293细胞,高浓度NaCl培养基培养BAECs细胞建立高渗细胞模型;2,5-ADP-琼脂糖凝胶、His标签蛋白纯化凝胶分别纯化eNOS、His标签WT-eNOS、His标签T866A-eNOS;AMPK敲低和AICAR处理BAECs细胞,Western blot检测eNOS、O-GlcNAc、OGT、OGA、P-AMPK、AMPK蛋白表达;格里斯试剂法（Griess reagent）检测BAECs培养基中NO的含量。2.动物实验:将20只雄性C57 BL/6小鼠随机分为Control组、高渗组,食物中4%NaCl和饮水中1%NaCl喂养小鼠4周建立高血压小鼠模型,记录各组摄入食物、水、NaCl和体重等情况。使用无创尾动脉血压测量仪定期检测各组小鼠的血压,2,5-ADP-琼脂糖凝胶纯化主动脉eNOS,Western blot检测其O-GlcNAc和eNOS,微血管张力测定仪检测大鼠离体血管内皮依赖性舒张功能。结果:1.细胞实验:经高渗、热应激、过氧化氢处理后,eNOS O-GlcNAc升高;缺氧、酒精中毒处理后,eNOS、O-GlcNAc没有明显变化,酸中毒处理后,eNOS O-GlcNAc降低。高渗处理BAECs后,eNOS O-GlcNAc升高,T866A-eNOS转染后能逆转eNOS O-GlcNAc的升高。高渗引起BAECs OGT、P-AMPK蛋白表达升高,AMPK敲低逆转OGT和O-GlcNAc的升高;而AMPK的激动剂AICAR增加OGT和O-GlcNAc的蛋白表达量,转染T866A-eNOS后逆转其升高。高渗处理BAECs后,培养基中NO含量升高。2动物实验:高渗盐水建模后,实验组摄水、摄食能力明显增多,体重下降,主动脉eNOS O-GlcNAc明显升高;反复测量血压显示舒张压升高,收缩压较基础值高但无统计学意义;血管张力实验证实内皮依赖性舒张功能明显受损,收缩功能无明显损伤。结论:高渗通过Thr866位点上调eNOS O-GlcNAc修饰水平,其机制可能是通过激活AMPK从而上调OGT产生,进而引起内皮依赖性舒张功能受损。
其他文献
目的:探讨不同喂养方式对牛奶蛋白诱导食物蛋白性直肠结肠炎患儿远期免疫耐受结局的影响。方法:采用回顾性队列研究设计,以2015年1月1日至2016年12月31日重庆医科大学附属儿童医院消化科确诊并有效随访的牛奶蛋白诱导食物蛋白性直肠结肠炎患儿85例作为研究对象,根据喂养方式分为母乳组（n=18）、深度水解奶粉组（n=22）、氨基酸奶粉组（n=17）、母乳+深度水解奶粉组（n=17）、母乳+氨基酸奶粉
鼻咽癌（Nasopharyngeal carcinoma,NPC）是一种常见的头颈部恶性肿瘤,且具有明显的地理分布特征。过去十年的流行病学趋势表明,鼻咽癌的发病率逐渐降低,死亡率大幅下降,但其发病机制尚不完全清楚,仍需要进一步深入地探究。本研究综合采用生物信息学分析手段和多种分子肿瘤学研究技术,系统地分析了鼻咽癌转录物组数据集,并对发现的一个新的候选鼻咽癌关键基因KIF2C（Kinesin fam
目的:研究过敏性哮喘对小鼠认知功能的影响,并探讨二者之间的潜在机制,为深入探索过敏性哮喘与认知能力的关系提供理论依据。方法:将40只6-8周龄的C57BL/6J小鼠随机分为Control组、Na Cl组、HDM组和DEX组,每组各10只。用Morris水迷宫检测各组小鼠造模前的学习记忆能力,随后在第1天和第14天给予HDM组和DEX组小鼠浓度为20ug/30ul的屋尘螨（House dust mi
背景:高尿酸血症、肺动脉高压、肾衰竭和碱中毒综合征（HUPRA综合征）是一种罕见的常染色体隐性线粒体疾病。编码丝氨酰-t RNA合成酶的SARS2基因是HUPRA综合征唯一的致病基因。既往报道的HUPRA综合征均为SARS2基因上的错义突变,突变形式均为纯合突变。方法:我们通过全基因组测序鉴定了一例由SARA2基因复合杂合突变引起HUPRA综合征,并用ACMG标准验证其致病性。回顾所有既往发现的S
目的:对羟基苯甲酸酯（Parabens,PBs）是一类能够广泛抑制各种微生物的化学防腐剂,其中最常用的是对羟基苯甲酸甲酯、乙酯（Ethylparaben,EtP）和丙酯（Propylparaben,PrP）。长期以来人们认为PBs是安全的,但近年来研究发现它们具有弱雌激素（Oestrogen,E2）效应。E2对雌性生殖过程至关重要,有研究表明PBs暴露会损害雌鼠生育能力,但其具体机制尚不清楚。子宫
第一部分 脂多糖刺激下星形胶质细胞Rab8a促囊泡锚定的作用和机制研究目的:神经病理性疼痛（neuropathic pain,NPP）是最常见的慢性、顽固性疼痛。在星形胶质细胞中通过囊泡转运释放炎症因子可能是NPP的重要发病原因之一,本研究旨在探寻Rab8a在NPP中促囊泡锚定的作用,并初探其机制。方法:把原代Sprague-Dawley（SD）乳鼠星形胶质细胞随机分为正常对照组和LPS组,其中L
目的比较电针、二甲双胍和二者联合这3种不同的干预方式对阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）模型小鼠（APP/PS1）认知功能改善情况及对脑内皮质及海马区老年斑（Senile Plaques,SPs）、β-分泌酶（β-site APP cleaving enzyme 1,BACE1）、胰岛素降解酶（Insulin-degrading enzyme,IDE）及磷脂酰肌醇3-激酶
背景:对于非手术治疗的坏死性小肠结肠炎（NEC）的患儿,NEC后最佳禁食时间尚无共识,本研究报告了早期（<7天）和晚期（≥7天）重启喂养对预后的影响。方法:选取重庆医科大学附属儿童医院新生儿科2015年1月-2017年1月218例诊断为新生儿坏死性小肠结肠炎的患儿为研究对象进行回顾分析。将患儿随机分为早期组和晚期组,NEC诊断后<7天重启喂养为早期组,诊断NEC后≥7天重启喂养为晚期组。对两组患儿
目的:肝癌,作为一种常见的恶性肿瘤,在我国恶性肿瘤发生率排名中占据前列,同时也是世界范围内因癌症导致死亡的第三大原因[1]。代谢重编程是包括肝癌在内的肿瘤代谢的一个关键特征,它使得肿瘤细胞一方面获得必需的生物大分子用于细胞增殖,一方面还能产生能量以供自身需求。脂肪酸受体CD36是一种整合的跨膜糖蛋白,在各种组织中表达,参与长链脂肪酸的高亲和性摄取[2]。CD36在肝脏的糖代谢和脂肪酸代谢中的重要性
目的:研究分析儿童郎格汉斯细胞组织细胞增多症（LCH）中贫血的临床特征,包括贫血发生率、贫血类型及程度,探讨贫血发病机制,为LCH中贫血的诊治提供方向。方法:收集2015年1月1日至2019年12月31日于重庆医科大学附属儿童医院血液肿瘤中心诊治的138例LCH患儿的临床资料,包括病史、初诊时影像学及实验室检查资料、疾病转归情况,回顾性分析其临床特征。结果:1)138例LCH患儿男性较女性多见,男