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第一章子痫前期患者氧化应激和免疫活化及其临床意义研究目的：研究胎盘缺氧性损伤、中性粒细胞活化与子痫前期患者氧化应激、免疫活化的相关性及其临床意义。方法：1．免疫组化技术研究子痫前期患者胎盘组织缺氧性损伤，以ROS探针H2-DCFDA进行全血染色，结合流式细胞仪检测子痫前期患者循环PMN细胞胞内ROS水平，评估其活化水平：2．以H2O2检测试剂盒，分光光度法直接检测子痫前期患者血清中H2O2水平，评价患者氧化应激水平；3．流式细胞仪技术全血染色方法检测子痫前期患者外周血CD3+／HLA-DR+和CD3+／CD62L+T淋巴细胞及PMN细胞表达CD62L分子水平；4．LUMINEX液相芯片技术检测子痫前期血清可溶性因子：IL-6、IL-8、MCP-1、TNF-α、VEGF、NT-proBNP、IFN-γ、IL-1β和IL-10表达。结果：1．与正常妊娠孕妇（n=19）比较，子痫前期患者（n=16）胎盘组织存在显著缺氧应激性损伤特征；2．与正常非孕妇女（n=12）或正常妊娠妇女比较，子痫前期患者血清H2O2水平和PMN胞内ROS水平均显著升高（p＜0.01）；3．与正常非孕妇或正常孕妇比较，子痫前期患者外周血CD3+／HLA-DR+细胞百分率显著升高（p＜0.01）；与正常非孕妇比较，子痫前期患者或正常孕妇CD3+／CD62L+细胞百分率均显著升高（p＜0.01），但与正常孕妇比较，子痫前期患者CD3+／CD62L+细胞百分率显著降低（p＜0.01）；4．子痫前期患者全血中粒细胞CD62L分子平均荧光强度与正常妊娠孕妇比较，有显著性降低（p＜0.01），与正常非孕妇比较则显著升高（p＜0.01）；5．子痫前期患者与正常孕妇比较，或正常孕妇与正常非孕妇间比较，血清中有5种可溶性因子：IL-6、IL-8、MCP-1、TNF-α和VEGF表达水平均有显著性差异（p＜0.05），与正常非孕妇或正常孕妇比较，WN-γ、IL-1β和IL-10水平均无显著性差异（p＞0.05）；6．子痫前期患者H2O2水平与PMN胞内ROS水平（r=0.506）、T细胞表达HLA-DR分子水平（r=0.728）及尿酸水平（r=0.607）分别呈正相关（0＜r＜1，p＜0.05）。结论：子痫前期患者缺氧应激性胎盘和外周PMN大量活化可能是其外周血高水平H2O2的来源，胎盘缺氧损伤可能是导致母体系统性氧化应激的根本原因；子痫前期患者存在明显的炎症性免疫活化，氧化应激与炎症免疫活化及疾病严重程度呈正相关，可能在子痫前期由第一阶段向第二阶段转化过程中发挥了关键作用；子痫前期患者PMN细胞CD62L分子脱落可能是其炎症活化的负反馈调节机制之一，在其疾病预后评估中可能具有潜在价值。第二章ROS对正常孕妇淋巴细胞及PMN活化和黏附能力的影响目的：研究外源性ROS对正常妊娠孕妇PMN及T细胞活化的影响及机制；探讨子痫前期患者血清高水平ROS与PMN、T细胞活化及黏附功能的关系。方法：1．以接近子痫前期患者血清浓度的40μmol／L外源性H2O2体外刺激正常孕妇PMN，流式细胞仪检测PMN活化水平及CD62L分子表达水平；2．流式细胞仪检测40μmol／L外源性H2O2对正常孕妇T细胞HLA-DR及CD62L分子表达水平的影响；3．流式细胞仪检测40μmol／L外源性H2O2预处理的正常孕妇PMN对T细胞HLA-DR及CD62L分子表达水平的影响。同时，利用细胞的黏附特性，探讨单核细胞及DCs细胞在此过程中的作用；4．应用扫描电镜技术研究40μmol／L外源性H2O2预处理对正常孕妇PMN黏附HUVECs能力的影响。结果：1．40μmol／L外源性H2O2可显著增加正常孕妇PMN胞内ROS水平（p＜0.01，n=12），并降低CD62L分子表达水平（p＜0.01，n=12）；2．40μmol／L外源性H2O2对正常孕妇T细胞HLA-DR及CD62L分子表达水平的没有显著影响（p＞0.01，n=12）；3.40μmol／L外源性H2O2可促进PMN细胞对HUVECs的黏附（p＜0.01，n=12）；4．40μmol／L外源性H2O2预处理的正常孕妇PMN可显著促进相同来源T细胞HLA-DR分子表达，并降低其CD62L分子的表达水平（p＜0.01，n=12）；当利用细胞的黏附特性，去除单核细胞或DCs细胞等黏附细胞时，这一作用受到明显削弱（p＜0.01，n=12）。结论：外源性H2O2可促进正常孕妇PMN活化，并可能在单核细胞及DC细胞等辅助下进一步促进T细胞活化水平；子痫前期患者血清高水平ROS可能是其PMN及T淋巴细胞活化促进因子之一。第三章重度子痫前期患者血清对HUVECs的损伤及其与ROS的关系研究目的：探讨重度子痫前期患者血清对HUVECs细胞的损伤作用及其与ROS、胞内钙离子浓度及线粒体跨膜电势的关系。研究方法：1．流式细胞仪、透射电镜等研究重度子痫前期患者血清对HUVECs细胞的促凋亡作用；2．激光共聚焦显微镜研究重度子痫前期患者血清对HUVECs细胞ROS、细胞内钙离子及线粒体跨膜电势的影响。研究结果：1．与正常孕妇血清比较，重度子痫前期患者血清刺激24h后，Hochest染色HUVECs可见发生明显凋亡；重度子痫前期患者血清可显著增加HUVECs细胞APO2.7分子表达水平（p＜0.01，n=12）；外源性过氧化氢酶可明显降低重度子痫前期患者血清对HUVECs细胞的毒性（p＜0.01，n=12）；2．与正常孕妇血清比较，重度子痫前期患者血清可显著增加HUVECs细胞胞内ROS水平和钙离子浓度（p＜0.01，n=12），并降低其线粒体膜电势，而外源性过氧化氢酶可明显削弱上述作用。研究结论：重度子痫前期患者血清对血管内皮细胞具有直接的损伤作用并与ROS相关；其机制可能与其中可溶性因子通过增加内皮细胞胞内ROS水平、促进钙超载和降低线粒体膜电势有关。