【摘 要】
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【目的】探究外周5-羟色胺对中性粒细胞胞外诱捕网形成的作用以及其对脓毒症小鼠肺损伤的影响,并初步探讨其机制。【方法】（1）通过PCR扩增、琼脂糖电泳法进行小鼠基因型鉴定,筛选出目的基因小鼠;选取6～8周龄野生型（WT型）和Tph1基因敲除(Tph1ko)C57小鼠,根据随机数字法将小鼠分为WT型小鼠假手术组,WT型小鼠脓毒症组,Tph1ko小鼠假手术组和Tph1ko小鼠脓毒症组,假手术组小鼠接受假
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【目的】探究外周5-羟色胺对中性粒细胞胞外诱捕网形成的作用以及其对脓毒症小鼠肺损伤的影响,并初步探讨其机制。【方法】（1）通过PCR扩增、琼脂糖电泳法进行小鼠基因型鉴定,筛选出目的基因小鼠;选取6～8周龄野生型（WT型）和Tph1基因敲除(Tph1ko)C57小鼠,根据随机数字法将小鼠分为WT型小鼠假手术组,WT型小鼠脓毒症组,Tph1ko小鼠假手术组和Tph1ko小鼠脓毒症组,假手术组小鼠接受假手术处理（仅打开腹腔轻轻翻动盲肠,但不进行结扎和穿刺,然后关腹）;脓毒症组小鼠接受盲肠结扎穿刺手术（CLP）以建立脓毒症模型;观察各组小鼠72小时之内的生存率;同时收集术后12小时各组小鼠肺组织,通过苏木精和伊红（HE）染色法光镜下观察各组间小鼠肺组织病理学损伤情况,通过计算小鼠肺组织干湿比观察各组小鼠肺水肿情况;再通过酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组间小鼠支气管肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）的含量差异。（2）通过组织免疫荧光法检测各组小鼠肺组织间中性粒细胞胞外诱捕网形成率的差异,及血小板指标CD41与中性粒细胞胞外诱捕网的相关性。（3）结合体内实验,通过细胞免疫荧光法检测在不加血小板的情况下,外源性5-羟色胺对中性粒细胞胞外诱捕网影响,同时检测WT小鼠来源血小板及Tph1ko小鼠来源血小板对WT小鼠来源中性粒细胞胞外诱捕网的影响;通过流式细胞术法检测活化的WT小鼠来源血小板及Tph1ko小鼠来源血小板对中性粒细胞胞外诱捕网的影响。【结果】（1）生存率结果表明,WT小鼠脓毒症组及Tph1ko小鼠脓毒症组的生存率均较各自品系小鼠假手术组显著降低,而Tph1ko小鼠脓毒症组相较于WT小鼠脓毒症组生存率显著提高（P＜0.05）;小鼠肺组织HE染色结果表明,WT小鼠及Tph1ko小鼠假手术组肺组织结构完好,未见明显渗出,肺泡壁未见明显增厚,脓毒症组小鼠肺泡结构可见破坏,大量炎性细胞浸润,肺泡壁可见增厚,而Tph1ko小鼠脓毒症组肺损伤程度较WT小鼠脓毒症组减轻;小鼠肺组织干湿比结果显示:与脓毒症小鼠组相比,假手术小鼠组干湿比较高,而WT小鼠脓毒症组干湿比低于Tph1ko小鼠脓毒症组（P＜0.05）;ELISA结果显示:WT小鼠假手术组及Tph1ko小鼠假手术组支气管肺泡灌洗液中TNF-α、IL-6含量比较差异无统计学意义;而脓毒症组小鼠支气管肺泡灌洗液中TNF-α和IL-6含量均较假手术组明显升高,且WT小鼠脓毒症组上述指标水平均明显高于Tph1ko小鼠脓毒症组（P＜0.05）。（2）组织免疫荧光结果表明,WT小鼠假手术组与Tph1ko小鼠假手术组肺组织中并未见明显中性粒细胞胞外诱捕网的形成,而脓毒症组小鼠肺组织中均检测到大量中性粒细胞胞外诱捕网的生成,明显高于假手术组,而Tph1ko小鼠脓毒症组中性粒细胞胞外诱捕网生成量较WT小鼠脓毒症组明显有所减少（P＜0.05）。（3）组织免疫荧光结果表明,假手术组小鼠肺中未出现中性粒细胞胞外诱捕网的形成,WT小鼠脓毒症组肺中可见大量血小板和中性粒细胞胞外诱捕网的聚集,而Tph1ko小鼠脓毒症组肺中中性粒细胞胞外诱捕网与血小板的这种聚集性显著减少。（4）细胞免疫荧光结果表明,外源性5-羟色胺不能直接诱导中性粒细胞胞外诱捕网的形成,也不能增加佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸（PMA）诱导的中性粒细胞胞外诱捕网形成;同时,不论是WT小鼠还是Tph1ko小鼠来源血小板,是否添加外源性5-羟色胺干预,在未被PMA激活的情况下均不能诱导中性粒细胞胞外诱捕网的形成;PMA激活的WT小鼠来源血小板可明显增加PMA诱导的中性粒细胞胞外诱捕网的形成,而Tph1ko小鼠来源的血小板则不能;各品系小鼠来源血小板与WT小鼠来源中性粒细胞共培养实验流式细胞术结果表明,与WT小鼠来源血小板相比,Tph1ko小鼠来源血小板在PMA的激活下,中性粒细胞瓜氨酸化组蛋白H3（Cit H3）的表达量较低。【结论】活化的血小板通过自分泌5-羟色胺信号通路促进脓毒症小鼠肺组织中中性粒细胞胞外诱捕网的形成。外周5-羟色胺缺乏通过抑制肺组织中中性粒细胞胞外诱捕网的形成,减少炎症因子的产生,保护肺免受脓毒症诱导的损伤,并提高脓毒症小鼠的存活率。
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