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科技的发展促进了医学研究的进步,恶性肿瘤的诊断及治疗水平不断提高。手术、药物,免疫、靶向治疗等多种治疗手段广泛用于肿瘤的治疗中,虽然可达到抑制肿瘤细胞生长的作用,但依然无法实现肿瘤的完全治愈。阐明恶性肿瘤细胞形成发展机制,对肿瘤的预防及治疗至为重要。子宫内膜癌作为女性生殖器官常见的恶性肿瘤,具有较高的5年生存率,但晚期病例预后仍较差,且发病率升高和年轻化趋势也越来越显著。研究子宫内膜癌形成发展的分子机制,有利于肿瘤的早期诊断及精准治疗。HOXA-AS2（HOXA cluster antisense RNA2）,a 1048bp RNA,作为一个长链非编码RNA最早研究发现其在反视黄酸治疗的早幼粒细胞白血病细胞中起到抑制凋亡的作用,其转录物在NB4早幼粒白血病细胞和人类外周血中性粒白细胞中表达,反视黄酸治疗的早幼粒细胞白血病细胞中表达上调。HOXA-AS2在胃癌中表达上调,且与肿瘤的大小、病理分期及预后相关,通过与EZH2相结合抑制P21、PLK3、DDZT3的表达,进而促进肿瘤的增殖、抑制肿瘤细胞的凋亡。现今尚无HOXA-AS2在子宫内膜癌中的作用的相关报道,其在内膜癌细胞中的作用有待于研究。越来越多的研究发现lnc RNA调控mi RNA发挥生物学功能。利用生物信息学数据库查询HOXA-AS2与hsa-mi R-302c-3P的结合位点,显示人类HOXA-AS2存在与mi R-302c的结合区域。mi RNA-302c抑制多种恶性肿瘤的发展,其中乳腺恶性肿瘤细胞的雌激素受体受到mi RNA-302c直接干预,遂我们推测在同为雌激素相关的子宫内膜癌中其也可能发挥作用。通过Target Scan预测到hsa-mi R-302c与ZFX的3’-UTR有结合位点。ZFX以转录因子的身份参与了许多肿瘤的发生和发展。转录因子ZFX可以通过“GGCCT”序列结合靶基因,通过查询YKL-40启动子区发现其启动子区存在ZFX的潜在的结合位点,预测YKL-40转录起始位点上游1000bp,存在两个“GGCCT”。研究发现YKL-40与腺上皮细胞来源肿瘤有关,并且其在子宫内膜癌中的高表达与预后不良相关。本实验研究的目的为通过检测HOXA-AS2、mi R-302c-3p、ZFX与YKL-40在子宫内膜癌组织中的表达水平及干扰HOXA-AS2、mi R-302c-3p、ZFX与YKL-40在子宫内膜癌细胞系Ishikawa中表达后检测子宫内膜癌细胞增殖、迁移能力和细胞周期、凋亡的变化,进而研究HOXA-AS2-mi R-302c-3p-ZFX-YKL-40调控轴影响子宫内膜癌的形成发展的具体机制,为子宫内膜癌的特异诊断和靶向治疗寻求新的位点。研究方法:Real-time PCR方法检测HOXA-AS2、mi R-302c-3p、ZFX与YKL-40在癌组织中的表达情况;荧光素酶报告分析验证HOXA-AS2与mi R-302c-3p的结合及潜在的结合位点;构建HOXA-AS2过表达和低表达后Real-time PCR检测mi R-302c-3p在Ishikawa细胞系中表达的变化,Real-time PCR及western blot检测ZFX与YKL-40的表达变化;构建mi R-302c-3p的过表达及低表达,Real-time PCR及western blot方法检测ZFX与YKL-40的表达变化;构建ZFX的过表达及低表达,Real-time PCR及western blot方法检测YKL-40的表达变化;分别构建HOXA-AS2、mi R-302c-3p、ZFX与YKL-40在子宫内膜癌Ishikawa细胞系中的过表达和低表达,分别采用CCK-8实验、迁移实验及细胞周期及凋亡实验检测对癌细胞相关能力的影响。结果:1、与正常子宫内膜比较,HOXA-AS2、ZFX、YKL-40在癌组织中高表达（p<0.05）;mi R-302c-3p在子宫内膜癌组织中低表达（p<0.05）。2、双荧光素酶报告基因验证HOXA-AS2与mi R-302c-3p具有靶向结合并验证了结合位点。3、CCK-8实验显示过表达HOXA-AS2对细胞增殖有明显的促进作用,Transwell实验分析显示随着HOXA-AS2的上调,子宫内膜癌的迁移能力明显增加,细胞周期实验结果显示,当HOXA-AS2表达上调后,增加了S期细胞数量,降低了凋亡细胞比例,当HOXA-AS2上调后mi R-302c-3p在Ishikawa细胞系中表达下调,两者呈现负相关,ZFX与YKL-40在Ishikawa细胞系表达上调,与HOXA-AS2呈正相关。4、上调mi R-302c-3p的表达后,Ishikawa细胞增殖能力下降,迁移能力受到抑制,细胞S期细胞显著减少,早期和晚期凋亡细胞比例较NC增加;伴随mi R-302c-3p表达的增高,在蛋白水平及基因水平ZFX与YKL-40在Ishikawa细胞系表达均下调,与之呈负相关。5、上调ZFX表达后Ishikawa细胞增殖能力及迁移能力明显提高,细胞周期中S期细胞显著增加,早期和晚期凋亡细胞比例较NC减少,随着其表达的提高YKL-40在Ishikawa细胞系表达也明显上调,两者呈正相关。6、上调YKL-40表达后Ishikawa细胞增殖能力及迁移能力明显提高,细胞周期中S期细胞显著增加,早期和晚期凋亡细胞比例较NC减少。结论:1、HOXA-AS2在子宫内膜癌组织中呈高表达且对子宫内膜癌细胞恶性生物学行为起到促进作用。2、mi R-302c-3p在子宫内膜癌组织中呈低表达对子宫内膜癌的恶性生物学行为起到抑制作用。HOXA-AS2与mi R-302c-3p具有结合位点,HOXA-AS2通过负向调控mi R-302c-3p发挥其对子宫内膜癌细胞的作用。3、ZFX与YKL-40在子宫内膜癌组织中均呈高表达,并可促进子宫内膜癌细胞的恶性生物学行为,ZFX作为转录因子正向调控YKL-40在子宫内癌细胞中的表达,ZFX与YKL-40均受到HOXA-AS2的正向调控和mi R-302c-3p的负向调控。4、HOXA-AS2负向调控mi R-302c-3p,进而调控ZFX、YKL-40来实现对子宫内膜癌生物学行为的调控。