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一直以来，在细菌耐药性产生和传播的基因机制中，研究者对耐药性质粒和转座子的研究比较多。近年，整合子一耐药基因盒系统成为研究人员关注的热点，其在革兰阴性菌中对细菌耐药性的介导作用已经得到逐步的确认。而革兰阳性菌作为一类重要的病原菌，研究者还没有系统地展开整合子一耐药基因盒系统在革兰阳性菌中介导细菌耐药性产生和传播作用的研究。
为了探讨整合子在革兰阳性菌耐药机制中的介导作用，对分离自广州暨南大学附属第一医院住院患者临床标本的46株革兰阳性菌做三类整合子的筛选。首先研究了它们对13种常用抗菌药物耐药性情况。结果表明所有的菌株对其中至少一种抗菌药物产生耐药，且大部分的菌株(96％)对至少三种或以上的抗菌药物产生耐药。应用多重PCR法检测三类整合酶基因，发现46株菌均为第一类整合子阳性菌株，没有菌株为第二、三类整合酶基因阳性。
以IN-F和IN-B对46株第一类整合子阳性菌株整合的耐药基因盒进行扩增。结果表明，在46株第一类整合子阳性菌株中，有45株菌产生大约1.9kb的片段，有1株菌(GHl85)产生两个片段，大小分别为1.9 kb和1.0kb。随机挑选了GHl35和GH263两株菌的1.9 kb扩增片段进行DNA测序。首先把DNA扩增片段进行凝胶纯化，连接到pMDl8 T-载体，连接反应液转化到大肠埃希菌E-coli DH50~，在含有100ug／ml氨苄青霉素的平板上筛选转化子，提取重组质粒后进行DNA序列测定。序列分析的结果表明，1.9 kb的片段大小为1913 bp，含有耐药基因盒dh．厂，XII、未知功能的读码框架orfF和耐药基因盒aadA2。dhfrFXII编码二氢叶酸还原酶，介导细菌产生对甲氧苄氨嘧啶的耐药；aadA2编码腺苷酰转移酶，介导细菌产生对氨基糖苷类抗生素链霉素及壮观霉素的耐药。而对于GHl85扩增得到的1.0kb片段，由于本实验室已对沙门菌S-tshiongwe S191中第一类整合子相同大小的耐药基因盒PCR扩增片段(GenBank accession no．AY263741，含有耐药基因盒aadA2，数据已公开发表)进行了测序，将以PCR-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法对其序列进行分析。
对用IN—F和IN—B扩增得到的46个1.9 kb的片段、1个1.0kb的片段和来自沙门菌S．tshiongwe S191的1.0kb的片段分别用BstP I、EcoR I和Sty I三种限制性内切酶进行PCR．RFLP分析，得到相同限制性酶图谱的片段则认为是含有相同的耐药基因盒。PCR．RFLP分析结果表明46个1.9 kb的片段具有一样的限制性酶图谱，分别来自GH185和S.tshiongwe S191的两个1.0kb的片段得到一致的限制性酶图谱。故可推断45株第一类整合子阳性菌株整合的耐药基因盒均为dhfrXII-orfF-aadA2；GH185至少携带两个拷贝的整合子，整合的耐药基因盒分别为dhfrXII-orfF-aadA2和aadA2。本研究中，同种属和不同种属的病原菌中的第一类整合子携带相同的基因盒排列，结果提示存在医院内感染和病原菌间耐药基因水平传播的可能性。本论文研究了第一类整合子介导的医院住院患者革兰阳性菌的耐药特性，提示应全面对细菌中整合子介导的耐药基因水平转移进行监测。同时，本论文的数据为耐药基因在革兰阳性菌和革兰阴性菌之间传播的研究奠定了基础，也为控制致病菌的耐药性表达提供了研究思路。