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研究目的西妥昔单抗(cetuximab)是一种表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂,作为晚期结直肠癌一线治疗的重要分子靶向药物在临床上广泛应用,然而半数以上的结肠癌患者因KRAS、BRAF、PIK3突变而对西妥昔单抗耐药,即使是KRAS野生型的患者应用西妥昔单抗有效率也仅约40%-60%。为使更多的结直肠癌患者能从西妥昔单抗的治疗中获益,需要进行逆转其耐药的研究。曲美替尼(trametinib)是一种丝裂酶原活化细胞外信号调节激酶(ERK)1/2可逆性抑制剂,其作用于KRAS-BRAF-MEK-ERK-MAPK信号通路的中游,主要通过对MEK蛋白的作用,影响MAPK通路,抑制细胞增殖。因此,本实验拟研究西妥昔单抗、曲美替尼在体外条件下对人结肠癌细胞增殖和凋亡的影响及联合用药是否具有协同作用。研究方法选用三种不同结肠癌细胞系SW48(KRAS野生型,BRAF野生型),SW480(KRAS G12V突变型,BRAF野生型),HT-29(KRAS野生型,BRAFV600E突变型)作为研究对象,将每种细胞系随机分为正常培养组、西妥昔单抗组(200μg/ml)、曲美替尼组(1nmol/l)和两药联合组四组,体外培养72h后,采用CCK-8(cell counting kit-8)法检测细胞增殖能力,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率。研究结果1、细胞增殖:经西妥昔单抗处理后,SW480、HT-29细胞增殖率无明显变化(P>0.05),SW48细胞增殖率显著降低(P<0.001);经曲美替尼处理后,三种细胞增殖率均有显著降低(P<0.01);两药联合可更进一步抑制三种细胞系的增殖(P<0.05)。2、细胞凋亡:西妥昔单抗单药对SW48、SW480和HT-29三株细胞凋亡率的影响无显著性差异(P>0.05);曲美替尼单药对SW480、HT-29有显著诱导凋亡作用(P<0.05),对SW48诱导凋亡作用不明显(P>0.05);联合用药组对比西妥昔单抗组,HT-29、SW480细胞凋亡率的升高有统计学意义(P<0.05),SW48的凋亡率变化无显著性差异(P>0.05);三种细胞两药联合组与曲美替尼组的凋亡率对比(P>0.05)均未见统计学差异。结 论西妥昔单抗与曲美替尼联合可以有效的的抑制结肠癌细胞增殖和诱导凋亡,显著提高KRAS、BRAF突变型结肠癌细胞对西妥昔单抗的药物敏感性,对KRAS、BRAF野生型结肠癌细胞的抗肿瘤作用也有一定程度的改善,两药联合在体外具有协同增效的抗肿瘤作用。