论文部分内容阅读
沙冬青系豆科旱生植物,是亚洲中部荒漠特有的常绿阔叶灌木。其只有蒙古沙冬青(Ammpiptanthus mongolicus(Maxim.)Cheng f.)和新疆沙冬青(Ammpiptanthus nanus(M.Pop.)Cheng f.)两个物种,主要分布在内蒙古、宁夏、甘肃及新疆西南部克孜勒苏自治州以及邻近的中亚地区。据文献报道,该植物的化学成分主要为生物碱类和黄酮类化合物,大量研究表明多数黄酮类化合物具有较好的抗病毒、抗肿瘤、抗癌、抗氧化、抗炎症、抑菌等药理活性。本文对沙冬青种子总黄酮的提取工艺、含量测定、急性毒性和抗病毒活性进行了系统研究,并对沙冬青种子总黄酮的提取、浓缩、干燥、测定等关键工艺技术进行了研究和确证,采用超声波辅助提取沙冬青种子总黄酮,响应面分析法优化最佳提取工艺条件,以槲皮素为对照品,采用分光光度法进行测定沙冬青种子中总黄酮含量,建立了沙冬青种子总黄酮的最佳提取工艺及其测定方法;采用单次给药口服灌胃方法检测了沙冬青种子总黄酮的半数致死量;采用MTT比色法和CPE观察法相结合研究沙冬青总黄酮的抗病毒活性分别采用了感染病毒同时给药、给药后接种病毒、先感染病毒后给药三种方式,确定沙冬青总黄酮安全浓度和给药途径。1.沙冬青种子总黄酮最佳提取工艺:提取温度为41.8℃,乙醇体积分数为67.28%,提取时间为52.67min,料液比为21.20g/mL。颜色反应鉴定提取物为黄酮类化合物。紫外分光光度法测得沙冬青种子总黄酮的含量为0.326%。2.沙冬青种子总黄酮对小鼠的半数致死量LD50为2004.47mg/kg,LD50的95%可信限为1693.78~2372.47mg/kg。死亡小鼠急性毒性主要表现为安静少动,即而出现走路不稳、腹卧昏睡、呼吸急促、连续性抽搐而死亡。小鼠在沙冬青种子总黄酮中毒后,心脏、肝脏、脾脏和肾脏等主要器官都受到一定程度的损害,但对小鼠的持续影响较小。3.在安全浓度范围内沙冬青总黄酮药物抗牛病毒性腹泻病毒(BVDV)作用具有很好的量效关系,沙冬青种子总黄酮在体外随药物质量浓度的增加其细胞存活率和病毒抑制率明显升高,病毒的TCID50为10-7.733/0.1mL;当浓度小于等于0.187mg/mL时,沙冬青种子总黄酮对牛肾原代细胞(MDBK)无毒,且当浓度为0.187mg/mL时,细胞存活率达104.26%。超过了100%,说明当沙冬青种子总黄酮的浓度小于0.187mg/mL时,不但对细胞没有毒性,而且还可促进细胞增殖;药物质量浓度在安全剂量即小于0.187mg/mL,同时给药,细胞生长良好,细胞层完整,视野中未见大量圆细胞或死细胞,而其余2种给药途径细胞病变明显。表明同时给药途径的细胞保护率和病毒抑制率明显高于其余2种给药途径。确定了超声波辅助提取法作为沙冬青种子总黄酮的提取方法,并通过颜色反应对其进行了鉴定,建立了紫外分光光度法测定沙冬青种子总黄酮含量的方法,该方法简便易行,准确可靠,可作为沙冬青总黄酮质量控制的方法,为开发利用沙冬青提供实验依据;急性毒性试验证明了沙冬青种子总黄酮为低毒性物质;并具有较强的抗BVDV的活性。为抗病毒创新药物的研究与开发奠定了基础并提供重要的实验数据和科学依据。