雪旺氏细胞样细胞外泌体促进大鼠坐骨神经再生作用机制研究

来源 :遵义医科大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:sherryholmes
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:探究人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,h AMSCs)来源的雪旺氏细胞样细胞(Schwann cell-like cells,SCLCs)外泌体对周围神经损伤的修复作用,以及其促进周围神经修复再生的机制。方法:(1)从人羊膜组织中提取h AMSCs,培养至P3代,通过细胞形态观察、细胞免疫荧光、流式细胞术进行鉴定,并通过三系诱导实验检测其分化能力;(2)通过一系列细胞因子序贯诱导,使h AMSCs分化成SCLCs,通过细胞形态观察、Western blot、q PCR和细胞免疫荧光检测雪旺氏细胞(schwann cells,SCs)标记物GFAP、S100的表达来鉴定SCLCs;(3)通过差速离心法分离h AMSCs外泌体(human amniotic mesenchymal stem cells derived exosomes,h AMSCs-exo)和SCLCs外泌体(Schwann cell-like cells derived exosomes,SCLCs-exo),透射电镜下观察提取到的外泌体形态,Western Blot鉴定CD9、CD63、TSG101外泌体特异性标记的表达,纳米粒径跟踪分析仪检测外泌体的粒径大小;(4)使用SD大鼠建立坐骨神经横断损伤模型,分别用h AMSCs-exo、SCLCs-exo、PBS(Control组)治疗,6周后通过各组大鼠坐骨神经功能指数(sciatic nerve functional index,SFI)、腓肠肌湿重、腓肠肌马松染色、神经甲苯胺蓝染色、神经透射电镜观察、神经HE染色、神经CD31、NF200免疫荧光染色评估神经修复情况;(5)将h AMSCs-exo、SCLCs-exo分别与SCs共同孵育,检测外泌体是否被细胞摄取;(6)h AMSCs-exo、SCLCs-exo分别与SCs共同孵育后,Transwell实验检测SCs迁移变化,Ed U实验检测SCs增殖变化,q PCR检测SCs中髓鞘生成、神经营养因子、促血管生成相关因子表达变化情况。结果:(1)h AMSCs具有良好的间充质干细胞特性及分化能力,可经过细胞因子序贯诱导为SCLCs;我们使用差速离心法分离出了高纯度的h AMSCs、SCLCs外泌体。(2)坐骨神经横断术后第3周开始,对各组大鼠SFI值进行量化,结果显示SCLCs-exo组>h AMSCs-exo>Control组(P<0.01);坐骨神经横断术后6周,对各组大鼠再生神经直径进行量化,结果显示SCLCs-exo组>h AMSCs-exo>Control组(P<0.01)。再生神经的HE染色结果显示,再生神经纤维致密程度为SCLCs-exo组>h AMSCs-exo>Control组;轴突的NF200免疫荧光染色结果显示,再生神经的NF200阳性轴突数SCLCs-exo组>Control组(P<0.01)和h AMSCs-exo组(P<0.05),h AMSCs-exo组>Control组(P<0.05);再生神经的甲苯胺蓝染色结果显示,再生神经有髓神经纤维密度SCLCs-exo组>h AMSCs-exo>Control组(P<0.01)。对再生神经形成的髓鞘厚度统计显示,髓鞘厚度SCLCs-exo组>h AMSCs-exo>Control组(P<0.01);对髓鞘的G-ratio统计显示SCLCs-exo组<h AMSCs-exo组<Control组(P<0.01);各组大鼠新生神经中点横截面CD31免疫荧光染色图像显示,CD31阳性染色细胞数SCLCs-exo组和h AMSCs-exo组均多于Control组(P<0.01),但SCLCs-exo组和h AMSCs-exo组之间无统计学差异;腓肠肌的湿重比和肌纤维的马松染色结果显示,SCLCs-exo组大鼠腓肠肌湿重比和肌纤维横截面积均高于h AMSCs-exo和Control组(P<0.01),h AMSCs-exo组均高于Control组(P<0.05)。(3)h AMSCs-exo和SCLCs-exo均能被SCs有效摄取,并促进其增殖和迁移,SCLCs-exo对SCs的增殖作用高于h AMSCs-exo(P<0.05),h AMSCs-exo和SCLCs-exo均可促进SCs迁移,效果相当。SCLCs-exo可上调SCs中髓鞘正调控因子Sox10、Egr2、Oct-6的m RNA表达,MBP、MPZ髓鞘蛋白的m RNA表达,以及神经营养因子GDNF的m RNA表达。结论:(1)h AMSCs-exo可通过促进SCs增殖、迁移促进大鼠周围神经再生;(2)SCLCs-exo可通过促进SCs增殖、迁移,促进SCs中髓鞘正调控因子Sox10、Egr2、Oct-6的m RNA表达,促进MBP、MPZ髓鞘蛋白的m RNA表达和神经营养因子GDNF的m RNA表达进而促进周围神经再生;(3)SCLCs-exo的促神经再生效果优于h AMSCs-exo,主要表现为神经功能恢复更好、再生神经纤维密度更大、再生神经髓鞘形成更多更厚、腓肠肌恢复率更高。
其他文献
目的:探讨前列腺动脉栓塞术(PAE)治疗良性前列腺增生(BPH)的临床疗效并分析其与术后24小时内前列腺特异性抗原(PSA)变化情况的相关性。方法:采用回顾性分析方法,从遂宁市中心医院2019年7月~2021年8月就诊的BPH患者中,根据纳入和排除标准,共收集62例BPH患者。接受PAE治疗的患者作为观察组(PAE组:17例),接受TURP治疗的患者作为对照组(TURP组:45例)。收集数据包括患
学位
目的:比较既往行肌瘤挖除术与聚焦超声消融(focused ultrasound ablation,FUA)的子宫肌瘤患者盆腔粘连情况,并分析影响盆腔粘连的因素。方法:选取2014年1月至2020年10月,在遂宁市中心医院收治的诊断为子宫肌瘤,行了肌瘤挖除术或聚焦超声消融术(focused ultrasound ablation surgery,FUAS)治疗,并再次行手术治疗的患者,进行回顾性分析
学位
目的:1、通过研究该院2019年6月至2021年6月的无菌体液标本中检出的耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(Carbapenem-Resistant Enterobacterales,CRE)携带的碳青霉烯酶及其耐药情况,分析其同源性,为该院感防控及临床合理用药提供参考依据,预防及减少CRE的产生。2、以聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)测序为标准,比较碳青霉烯酶
学位
目的:本研究旨在了解慢性自发性荨麻疹(chronic spontaneous urticaria,CSU)的流行病学特征以及CSU与生物钟基因的关系。方法:1.CSU流行病学调查研究:选取240例CSU患者填写流行病学调查问卷,内容包括性别、年龄、发病年龄、病程、好发时间、就诊近一周的睡眠节律、饮食节律、晚上睡觉开灯情况、临床类型、瘙痒程度以及每周荨麻疹活动度评分(urticaria activi
学位
目的:分析总结Salter骨盆截骨术对发育性髋关节发育不良(DDH)和股骨头缺血性坏死(LCPD)患者的疗效。方法:收集我院2010年1月至2020年1月经Salter骨盆截骨术治疗的DDH和LCPD患者的临床资料,根据纳入和排除标准筛选患者,通过查阅参考文献,根据患者年龄进行分组,采用髋臼指数(AI)、中心边缘角(CEA)、国际髋关节发育不良研究所(IHDI)分型、Herring分型、Sever
学位
自人类产生以来,人类一直在追求自我发展和自身完美。从古至今,无论是帝王将相还是平民百姓都渴望长命百岁甚至长生不死,容颜永驻,绝世聪明、武功盖世等。这些看似不切实际的“幻想”恰恰是人类想要增强自己、超越自己的最真实表达。虽然目前学界关于人类增强没有一个具体的定义。但可以认同的是,广泛意义上的人类增强就是指超出人本身具有的“自然”属性,体现出人的“价值”,简言之,人可以按照自己的意愿自由选择,最终满足
学位
目的:通过锥形束CT扫描三维重建技术分析安氏Ⅱ~1错不同垂直骨面型成年女性的面部骨性轮廓,旨在了解不同垂直骨面型的面部骨性轮廓特征及差异,为正畸临床诊断、矫治设计、治疗及预后提供参考。方法:选取自2017年1月至2021年12月于遵义医科大学附属口腔医院正畸科一组就诊的18-40岁成年女性患者,根据纳入及排除标准选择安氏Ⅱ~1错共100例,按照垂直骨面型分为三组:高角组(FH-MP>32°)为
学位
目的:颈动脉粥样硬化(Carotid Atherosclerosis,CA)是脑梗死(Cerebral Infarction,CI)发生及发展的重要原因,其严重程度与脑梗死发生风险相关。同型半胱氨酸(Homocysteine,HCY)是CA的重要影响因素,在体内主要通过亚甲基四氢叶酸还原酶(Methylenetetrahydrofolate Reductase,MTHFR)代谢。MTHFR基因多态
学位
目的:探究脂肪干细胞胶条件培养基(Stromal vascular fraction-gel-conditioned medium,SVF-gel-CM)促进糖尿病鼠创面愈合的机制,并阐明成脂信号对糖尿病创面愈合的影响,为SVF-gel-CM的临床应用提供理论基础。方法:1、探讨SVF-gel-CM促进糖尿病鼠创面愈合的机制:体外获取SVF-gel-CM,构建糖尿病小鼠皮肤创面模型,然后将SVF-
学位
目的:研究脐带延迟结扎(Delayed Cord Clamping,DCC)与脐带立即结扎(Immediate Cord Clamping,ICC)对早产儿脑血流动力学影响。方法:该试验是一项前瞻性、无创性研究。将满足纳入排除标准的早产儿按照其在产科完成的结扎脐带方式分为DCC组与ICC组,在生后1h内、24±1h、48±1h、72±1h时采用Mindray M9型彩色超声诊断仪分别测量大脑中动脉
学位