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目的:探究人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,h AMSCs)来源的雪旺氏细胞样细胞(Schwann cell-like cells,SCLCs)外泌体对周围神经损伤的修复作用,以及其促进周围神经修复再生的机制。方法:(1)从人羊膜组织中提取h AMSCs,培养至P3代,通过细胞形态观察、细胞免疫荧光、流式细胞术进行鉴定,并通过三系诱导实验检测其分化能力;(2)通过一系列细胞因子序贯诱导,使h AMSCs分化成SCLCs,通过细胞形态观察、Western blot、q PCR和细胞免疫荧光检测雪旺氏细胞(schwann cells,SCs)标记物GFAP、S100的表达来鉴定SCLCs;(3)通过差速离心法分离h AMSCs外泌体(human amniotic mesenchymal stem cells derived exosomes,h AMSCs-exo)和SCLCs外泌体(Schwann cell-like cells derived exosomes,SCLCs-exo),透射电镜下观察提取到的外泌体形态,Western Blot鉴定CD9、CD63、TSG101外泌体特异性标记的表达,纳米粒径跟踪分析仪检测外泌体的粒径大小;(4)使用SD大鼠建立坐骨神经横断损伤模型,分别用h AMSCs-exo、SCLCs-exo、PBS(Control组)治疗,6周后通过各组大鼠坐骨神经功能指数(sciatic nerve functional index,SFI)、腓肠肌湿重、腓肠肌马松染色、神经甲苯胺蓝染色、神经透射电镜观察、神经HE染色、神经CD31、NF200免疫荧光染色评估神经修复情况;(5)将h AMSCs-exo、SCLCs-exo分别与SCs共同孵育,检测外泌体是否被细胞摄取;(6)h AMSCs-exo、SCLCs-exo分别与SCs共同孵育后,Transwell实验检测SCs迁移变化,Ed U实验检测SCs增殖变化,q PCR检测SCs中髓鞘生成、神经营养因子、促血管生成相关因子表达变化情况。结果:(1)h AMSCs具有良好的间充质干细胞特性及分化能力,可经过细胞因子序贯诱导为SCLCs;我们使用差速离心法分离出了高纯度的h AMSCs、SCLCs外泌体。(2)坐骨神经横断术后第3周开始,对各组大鼠SFI值进行量化,结果显示SCLCs-exo组>h AMSCs-exo>Control组(P<0.01);坐骨神经横断术后6周,对各组大鼠再生神经直径进行量化,结果显示SCLCs-exo组>h AMSCs-exo>Control组(P<0.01)。再生神经的HE染色结果显示,再生神经纤维致密程度为SCLCs-exo组>h AMSCs-exo>Control组;轴突的NF200免疫荧光染色结果显示,再生神经的NF200阳性轴突数SCLCs-exo组>Control组(P<0.01)和h AMSCs-exo组(P<0.05),h AMSCs-exo组>Control组(P<0.05);再生神经的甲苯胺蓝染色结果显示,再生神经有髓神经纤维密度SCLCs-exo组>h AMSCs-exo>Control组(P<0.01)。对再生神经形成的髓鞘厚度统计显示,髓鞘厚度SCLCs-exo组>h AMSCs-exo>Control组(P<0.01);对髓鞘的G-ratio统计显示SCLCs-exo组<h AMSCs-exo组<Control组(P<0.01);各组大鼠新生神经中点横截面CD31免疫荧光染色图像显示,CD31阳性染色细胞数SCLCs-exo组和h AMSCs-exo组均多于Control组(P<0.01),但SCLCs-exo组和h AMSCs-exo组之间无统计学差异;腓肠肌的湿重比和肌纤维的马松染色结果显示,SCLCs-exo组大鼠腓肠肌湿重比和肌纤维横截面积均高于h AMSCs-exo和Control组(P<0.01),h AMSCs-exo组均高于Control组(P<0.05)。(3)h AMSCs-exo和SCLCs-exo均能被SCs有效摄取,并促进其增殖和迁移,SCLCs-exo对SCs的增殖作用高于h AMSCs-exo(P<0.05),h AMSCs-exo和SCLCs-exo均可促进SCs迁移,效果相当。SCLCs-exo可上调SCs中髓鞘正调控因子Sox10、Egr2、Oct-6的m RNA表达,MBP、MPZ髓鞘蛋白的m RNA表达,以及神经营养因子GDNF的m RNA表达。结论:(1)h AMSCs-exo可通过促进SCs增殖、迁移促进大鼠周围神经再生;(2)SCLCs-exo可通过促进SCs增殖、迁移,促进SCs中髓鞘正调控因子Sox10、Egr2、Oct-6的m RNA表达,促进MBP、MPZ髓鞘蛋白的m RNA表达和神经营养因子GDNF的m RNA表达进而促进周围神经再生;(3)SCLCs-exo的促神经再生效果优于h AMSCs-exo,主要表现为神经功能恢复更好、再生神经纤维密度更大、再生神经髓鞘形成更多更厚、腓肠肌恢复率更高。