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金属离子如Zn2+、Mn2+等在植物生长发育中起着重要作用,许多金属离子作为酶的辅基对植物的代谢至关重要。金属离子的缺失会引起植物叶绿素降解,但如果金属离子过多同样也会引起重金属毒害。MTP蛋白在调节植物金属离子平衡中起着十分重要的作用。本论文对水稻金属耐受蛋白OsMTP2进行了金属离子特异性及表达特性等方面的研究。主要结果如下:
1.用生物信息学方法对OsMTP2蛋白一级氨基酸序列、二级跨膜结构以及信号肽、启动子元件进行预测,结果表明该蛋白具有很强的疏水性,有四个跨膜结构域。该基因上游启动子序列中含有四个受金属诱导表达的顺式作用元件以及一个在维管束中特异表达必需的顺式作用元件。
2.乙酸锂转化酵母获得pYES260::OsMTP2转化菌株,转化菌株通过PCR验证后进行酵母互补实验。pYES260::OsMTP2能够提高酵母突变株对Mr12+、Ni2+、Zn2+、C02+的耐受性。该结果通过酵母突变株生长曲线进行验证。另外,OsMTP2在野生型酵母中异源表达能提高野生型酵母对Mn2+、Ni2+、Zn2+、C02+的耐受性。
3.通过花粉管通道法转化拟南芥Columbia(Col)生态型株系获得pMDI:: OsMTP2转化拟南芥植株,并得到4个独立的转基因纯合株系(T2、T13、T14、T16)。PCR鉴定表明外源基因OsMTP2已整合到拟南芥基因组上。转基因超表达植株在MS培养基上根长比野生型植株的短,但在金属离子(Mn2+、Ni2+、C02+)处理下与WT植株的根长基本一致。
4.OsMTP2 mRNA原位杂交实验表明该基因主要在水稻输导组织中表达。将pUC18GFP:: OsMTP2质粒通过基因枪导入洋葱表皮细胞,观察OsMTP2-GFP融合蛋白的荧光分布,推测OsMTP2主要定位在洋葱表皮细胞的内膜系统上。
综上所述,OsMTP2是一个膜整合蛋白,在金属离子跨膜转运中可能起着重要作用。