哌嗪作为一种有效的驱虫药,在兽医临床上应用广泛。由于兽医临床上不合理的使用,甚至滥用,以至该类药物残留于食品中的现象时有发生。人们长期食用含哌嗪的动物食品及其制品,会使人产生耐药性甚至导致药物中毒,对人类健康产生极大危害。目前,国内有关哌嗪残留的研究方法的报道,只有液相-质谱联用法,而且尚未有哌嗪相关残留检测方法标准发布。基于以上认识,本研究拟建立鸡肉和猪组织中哌嗪残留检测方法,不仅能为今后该药的残留监控提供技术手段,而且对提高动物性食品质量,保障消费者健康具有现实意义。1.建立哌嗪柱前衍生化方法：准确移取哌嗪标准工作液100μL于5mL的指形管,分别加AA00gL丹磺酰氯的标准储备液和pH=10的碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液,在涡流混合器上涡旋1min,然后快速离心30s,放入50℃的恒温水浴锅中避光反应30min。反应结束待管壁冷后,用2mL的乙酸乙酯萃取两次,合并萃取液到50mL的鸡心瓶,40℃涡旋蒸干。残留物用1mL的乙腈溶解,经0.45μm针筒式滤膜过滤后,20μL做HPLC分析。哌嗪标准工作液衍生后,保留时间的相对标准偏差为0.37%,峰面积的相对标准偏差2.73%。试验表明在设定的条件下哌嗪分离和定量的可靠性比较高,同时也说明了其衍生产物在一定的时间内是比较稳定的。2.建立哌嗪在动物组织中残留检测方法：动物组织经乙腈和高氯酸的混合提取液提取,乙腈饱和正己烷去脂,MCX固相萃取小柱净化,依次用2%磷酸溶液、甲醇、超纯水淋洗和10%氨水乙腈洗脱。洗脱液经氮气吹干,加入丹磺酰氯和缓冲液进行衍生,浓缩后用乙腈复溶,过滤。衍生产物选用ODS C18色谱柱进行高效液相色谱分析。流动相为乙腈和水(78：22,V/V),流速为1.0mL/min,柱温为35℃,紫外检测器检测波长为278nm,外标法定量。3.在选定的色谱条件下,哌嗪在0.05-2mg/kg范围内线性关系良好,相关系数R2=0.9997。哌嗪在0.05、0.5、2mg/kg3个添加水平上,鸡肉的平均回收率为87.31%～91.83%,日内日间变异系数分别为3.51%～7.16%和3.91%～7.86%；猪肉的平均回收率为87.77%-96.29%,日内和日间变异系数分别为2.13%～7.04%和2.31%～8.85%；猪肝的平均回收率为77.80%-87.70%,日内和日间变异系数分别为4.19%～6.45%和5.13%～7.06%；猪肾的平均回收率为78.85%～84.84%,日内和日间变异系数分别为3.06%～6.98%和3.11%～7.81%。本方法中哌嗪在动物食品中的最低检测限为0.03mg/kg,定量限为0.05mg/kg。本研究所建立的鸡肉和猪组织中哌嗪残留量的提取、净化和检测方法,适用于鸡肉和猪组织中哌嗪残留的测定。