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养殖水体中氨氮是制约鱼类生长的一个重要环境因子,研究和开发新的抗应激药物成为当前最主要的任务。本论文以大口黑鲈幼鱼为研究对象,研究两种抗应激药物对其抗氧化能力和免疫力等方面的影响,为后续开发绿色环保的抗应激药物提供科学依据。本论文研究结果有以下几个方面:1、氨氮对大口黑鲈幼鱼的急性毒性研究(1)实验过程中,平均水温为(22±0.2)℃,p H为7.80±0.02,溶氧>6.0mg·L-1,实验对象大口黑鲈幼鱼体质量为6.25±0.55g。氨氮对大口黑鲈幼鱼24h、48h、72h、96h的半致死浓度分别为:25.856mg·L-1、24.374mg·L-1、21.896mg·L-1、19.641mg·L-1,96h安全浓度为0.196mg·L-1;对应的非离子氨浓度分别为0.923mg·L-1、0.858mg·L-1、0.767mg·L-1、0.688mg·L-1。结果表明氨氮毒性和氨氮浓度、作用时间成正相关。(2)根据96h LC50设置四个浓度组:0、6mg·L-1、12mg·L-1、18mg·L-1,每个浓度下设置三个平行,每个平行放入30尾鱼,进行氨氮毒性试验,每24h各平行随机取3尾鱼,采集其鳃、脑、肝、头肾等组织测定谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)含量及其病理变化。结果表明:在氨氮胁迫下,鳃丝、脑的GSH含量均低于对照组,且氨氮浓度越高,作用时间越长,其含量越低,肝和头肾的GSH含量随作用时间的延长而下降,表明氨氮胁迫会引起大口黑鲈幼鱼机体的抗氧化能力减弱,免疫力下降;其次,各试验组大口黑鲈幼鱼组织中MDA含量显著高于对照组(P<0.05),和氨氮浓度呈正相关关系(P<0.05),且随着作用时间的延长呈现升高的趋势,表明氨氮胁迫会导致鱼体内的抗氧化酶活性下降,脂质过氧化物降解;而不同组织中NO的含量变化趋势各不相同。组织切片表明,氨氮胁迫会诱导鳃丝、脑、肝脏、头肾等不同组织出现病理变化,如细胞核碎裂、空泡化等,给机体带来实质性损伤。2、水中添加不同抗应激药物对大口黑鲈幼鱼的影响以体质量为(47.55±2.55)g的大口黑鲈幼鱼为研究对象,分别在曝气后的水中添加不同浓度的N-氨甲酰谷氨酸(NCG)、γ-氨基丁酸(GABA)、氯化钠(Na Cl),NCG的浓度分别为:0mg·L-1、150mg·L-1、200mg L·L-1、250mg·L-1、300mg·L-1、350mg·L-1,GABA的浓度分别为0mg·L-1、30mg·L-1、60mg·L-1、90mg·L-1、120mg·L-1、150mg·L-1,Na Cl的浓度分别为0、1‰Na Cl、1.5‰Na Cl、3‰Na Cl、4.5‰Na Cl、6‰Na Cl,在相同的光照、溶氧、氨氮、p H和水温的条件下进行96h的浸浴试验。结论如下:(1)高浓度的NCG浸浴会导致大口黑鲈幼鱼死亡:350 mg·L-1NCG浸浴96h,大口黑鲈幼鱼死亡率为26.67%。(2)NCG浸浴组,血清谷丙转氨酶(ALT)酶活性随时间的延长显著降低(P<0.05),血清碱性磷酸酶(AKP)酶活性先升高后降低,表明水中添加NCG会引起大口黑鲈幼鱼的机体反应,增强机体代谢功能;当水中添加的NCG为300mg·L-1或350mg·L-1时,CAT酶活性先降低后升高,肝脏中GSH含量先升高后降低,肝脏谷胱甘肽-S转移酶(GSH-ST)活性均随着时间的延长呈现下降的趋势,总抗氧化能力(T-AOC)活性随着时间的延长先升高后降低,表明高浓度的NCG会降低机体对H2O2的清除能力,增加了活性氧在体内的沉积量,加重了机体的应激反应。(3)GABA浸浴组,血清ALT活性先下降后上升高,AKP酶活性先升高后降低,CAT酶先降低后升高,肝脏GSH、GSH-ST活性均逐渐降低,T-AOC活性则逐渐上升且在72h时其活性均高于对照组,表明水中添加GABA可以激活大口黑鲈幼鱼的抗应激系统,提高其机体的抗氧化能力。(4)Na Cl浸浴组,血清ALT活性先升高后降低,AKP活性先降低后升高,肝脏CAT活性先升高后降低,GSH活性呈“升高-降低-升高”趋势,GSH-ST活性逐渐降低,T-AOC活性则逐渐升高,这表明水中添加Na Cl会引起大口黑鲈幼鱼机体产生复杂的反应,当添加量为6‰时,可以增强消除自由基的能力和提高机体的抗氧化能力。3、饲料中添加NCG对大口黑鲈幼鱼生理指标和抗氨氮胁迫的影响以体质量为6.25±0.55g的大口黑鲈幼鱼为研究对象,在大口黑鲈专用饲料中分别加入0mg·L-1、150mg·L-1、450mg·L-1、750mg·L-1的NCG,分组即CK组、A组、B组、C组,养殖15d后,采集大口黑鲈幼鱼的鳃、脑、肝、头肾组织测定GSH、MDA、NO含量;养殖试验结束后,进行96h的氨氮胁迫试验,氨氮浓度为15d,每隔24h采集大口黑鲈幼鱼的鳃、脑、肝、头肾组织测定GSH、MDA、NO含量,另采集氨氮胁迫24h的鳃、脑、肝、头肾组织观察大口黑鲈幼鱼的组织结构变化情况。结果如下:(1)15d养殖试验,大口黑鲈幼鱼的鳃、脑、肝、头肾中的GSH含量缓慢上升,但各组间的差异不显著(P>0.05);各组织MDA的含量则逐渐下降,但差异不显著(P>0.05),各组织NO含量出现下降趋势,且高浓度组下降趋势更明显,表明NCG拌饵投喂可以增强大口黑鲈幼鱼的免疫力。(2)氨氮胁迫24h,随着NCG浓度的升高,大口黑鲈幼鱼鳃丝细胞空泡化和脑组织坏死程度减轻,肝脏细胞损伤程度减小,表明NCG对大口黑鲈幼鱼抗氨氮胁迫有一定的缓解作用。(3)在96h氨氮胁迫下,大口黑鲈幼鱼各组织中的GSH含量下降但各组间差异不显著(P>0.05);MDA含量逐渐上升,且试验组和对照组间存在显著差异(P<0.05);各组织NO含量也出现逐渐上升,这表明NCG拌饵投喂对大口黑鲈幼鱼抗氨氮胁迫有缓解作用。4、饲料中添加GABA对大口黑鲈幼鱼生理指标和抗氨氮胁迫的影响以体质量为6.25±0.55g的大口黑鲈幼鱼为研究对象,在大口黑鲈专用饲料中分别加入30mg·L-1、90mg·L-1、150mg·L-1的GABA,分组即CK组、A组、B组、C组,养殖15d后,采集大口黑鲈幼鱼的鳃、脑、肝、头肾组织测定GSH、MDA、NO含量;养殖试验结束后,进行为期96h的氨氮胁迫试验,每隔24h采集大口黑鲈幼鱼的鳃、脑、肝、头肾组织测定GSH、MDA、NO含量,另采集氨氮胁迫24h的鳃、脑、肝、头肾组织观察大口黑鲈幼鱼的组织结构变化情况。结果如下:(1)饲料中添加GABA投喂大口黑鲈幼鱼15d后,对大口黑鲈幼鱼各组织中GSH、MDA、NO含量无显著性影响,但随着氨氮胁迫时间的延长,各组织中的GSH、NO含量逐渐上升,MDA含量逐渐下降,说明投喂GABA能够提高大口黑鲈幼鱼的抗氧化能力和免疫力。(2)随氨氮胁迫时间的延长,各组织中GSH含量逐渐下降,各组织中MDA含量逐渐上升,NO含量逐渐上升,脑组织中NO差异显著(P<0.05);随着GABA(3)量增加,鳃、脑、肝、头肾的损伤程度变小,说明投喂GABA对大口黑鲈幼鱼缓解氨氮胁迫有一定的作用,且投喂时间越长,投喂量越大,效果越显著。