【摘 要】
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由葡萄霜霉菌[plasmopara viticola（Berk.＆M.A.Curtis）Berl.＆De Toni]引起的葡萄霜霉病是葡萄生产中最具毁灭性的病害之一。欧洲葡萄（Vitis vinifera.L）在葡萄生产中占主导地位,具有良好的品质和商业价值,但其不抗霜霉病。相较于欧洲葡萄,中国野生葡萄高抗霜霉病。中国具有丰富的野生葡萄资源,利用中国野生葡萄种质资源,挖掘其内在的抗性基因改良欧洲葡
【基金项目】
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国家重点研发计划课题“果树应答真菌病害的分子机制与调控”（2018YFD1000307）； 国家自然科学基金面上基金项目“葡萄霜霉菌效应蛋白RxLR53与中国野生葡萄互作因子的鉴定和功能研究（31872054）”；
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由葡萄霜霉菌[plasmopara viticola（Berk.＆M.A.Curtis）Berl.＆De Toni]引起的葡萄霜霉病是葡萄生产中最具毁灭性的病害之一。欧洲葡萄（Vitis vinifera.L）在葡萄生产中占主导地位,具有良好的品质和商业价值,但其不抗霜霉病。相较于欧洲葡萄,中国野生葡萄高抗霜霉病。中国具有丰富的野生葡萄资源,利用中国野生葡萄种质资源,挖掘其内在的抗性基因改良欧洲葡萄具有重要意义。VpWRKY75在中国野生葡萄‘留坝-8’（Vitis piasezkii Liuba-8）和欧洲葡萄‘黑比诺’（Vitis vinifera cv.Pinot Noir）受霜霉菌（plasmopara viticola）侵染后差异表达。本试验在上述两种葡萄中克隆VpWRKY75,同时构建相关表达载体,在模式植物本氏烟草和拟南芥中进行了抗病性鉴定。通过共表达网络分析预测下游互作病程相关蛋白（Pathogenesis-related Proteins,PRP/PRs）蛋白,并通过酵母单杂技术验证互作。同时以VpWRKY75上游启动子序列作为诱饵,筛选葡萄霜霉菌诱导的中国野生复叶葡萄‘留坝-8’叶片酵母表达c DNA文库,获得VpWRKY75上游调控其表达的靶蛋白。本试验主要取得以下结果:（1）VpWRKY75具有一个WRKY结构域,VpWRKY75具有转录激活功能,但其WRKY保守结构域没有激活功能,VpWRKY75定位在细胞核。在烟草中瞬时过表达VpWRKY75,导致烟草叶片细胞死亡、过氧化氢（H2O2）含量增加。拟南芥At WRKY75突变体表现出对病原菌的感病性。（2）共表达网络分析预测得到了三个可能受到VpWRKY75调控的PR蛋白,分别为VpPR10.8、VpPR-like、VpPR4,克隆得到上述三个PR蛋白启动子,酵母单杂交实验发现VpWRKY75可以与VpPR10.8、VpPR-like蛋白启动子结合,瞬时转化葡萄叶片实验表明VpWRKY75并上调VpPR10.8、VpPR-like表达。（3）克隆得到VpWRKY75启动子,分析其启动子中顺式作用元件。以VpWRKY75启动子为诱饵,筛选葡萄霜霉菌诱导的中国野生复叶葡萄‘留坝-8’叶片酵母表达c DNA文库,得到了VpWRKY75上游调控因子。
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