星星草GAPDH和OPDR基因的克隆与表达分析

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星星草(Puccinellia tenuiflora)作为一种生长在北方地区的禾本科牧草,具有较强的耐盐碱性。在分子水平研究盐碱胁迫下星星草的耐盐碱基因和相关的抗逆机制对提高植物耐盐性、提高盐碱土壤利用率具有重要的意义。前期试验采用芯片杂交技术从星星草中筛选出了一批在盐碱胁迫下高丰度表达的基因,其中包括代谢过程中的关键酶GAPDH和OPDR。本试验主要是通过星星草抑制性消减杂交文库(suppression subtractive hybridization library,SSH)中GAPDH和OPDR的基因片段,对其进行全长的克隆。并利用生物信息学手段分析其基因序列、蛋白序列并构建基因的系统进化树。同时研究在不同Na2CO3胁迫下这两个基因的表达变化情况,为进一步研究星星草耐盐碱机理奠定一定的基础。本研究的结果如下:(1)以耐盐碱植物星星草为试材,构建星星草RACE cDNA文库。然后采用RACE技术从星星草中克隆出GAPDH和OPDR这两个基因的全长序列。(2)通过克隆获得的GAPDH和OPDR基因全长分别为1030 bp和978 bp,然后对这两个基因进行生物信息学分析得知:GAPDH和OPDR基因的开放阅读框内可分别编码含339和326个氨基酸的多肽链。GAPDH蛋白含有两个保守区它们分别属于Gp_dh_C superfamily和Gp_dh_N superfamily。经Blast分析得知:GAPDH基因与高羊茅,大麦中该基因同源性高达97%;OPDR基因与日本水稻中合成酶OPDR相关的一些基因同源性很高,如OPDAR1基因达84%。(3)对星星草进行不同浓度的Na2C03胁迫处理后,Northern杂交试验表明:GAPDH和OPDR基因的在植物叶片的表达量与对照相比均有增加;同时对星星草进行不同时间段的Na2CO3胁迫处理,这两个基因在叶片和根部的表达量与对照相比都有显著增加。以上结果均揭示GAPDH与OPDR基因和星星草盐碱耐受相关。
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