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目的:本课题采用BALB/c雄性小鼠建立DSS诱导的慢性溃疡性结肠炎动物模型,从干预IL-21/IL-21R信号通路探究补脾益肠丸调节记忆性T细胞治疗UC的可能作用机制。方法:1.动物分组、慢性溃疡性结肠炎动物模型复制及药物治疗:选用SPF级BALB/c雄性小鼠60只,随机分为6组,分别为正常组（Normal）、模型组（DSS）、补脾益肠丸低剂量组（DSS+BPYCP-L）、补脾益肠丸中剂量组（DSS+BPYCP-M）、补脾益肠丸高剂量组（DSS+BPYCP-H）和美沙拉嗪组（DSS+5-ASA）,每组10只。除正常组小鼠全程给予自由饮水以外,其余5组小鼠均给予3%DSS溶液连续自由饮用7 d后,中途停用DSS自由饮蒸馏水7 d后,再给予2%DSS溶液自由饮7 d,最后停用DSS自由饮蒸馏水2 d后处死小鼠,即复制成实验慢性溃疡性结肠炎模型。以小鼠第一天饮用3%DSS溶液为第1 d,第10 d开始按照小鼠体重灌胃给药治疗,正常组及模型组均灌予蒸馏水,补脾益肠丸低剂量组、中剂量组、高剂量组分别给予1.5 g/kg、3 g/kg、6 g/kg补脾益肠丸混悬液,美沙拉嗪组给予300 mg/kg美沙拉嗪肠溶片混悬液,每日固定时间灌胃1次,连续给药2周后处死小鼠,分离结肠和脾脏组织。2.补脾益肠丸治疗小鼠慢性溃疡性结肠炎的疗效评价:每天密切观察小鼠体重变化、饮食情况、精神状态、粪便形态及肛门出血等情况,每日固定时间取小鼠粪便进行隐血（occult blood,OB）评分,及计算疾病活动指数（Disease activity index,DAI）评分。给药治疗2周后将小鼠麻醉后处死,分离结肠,测量其重量和长度,计算其肠重指数及单位长度结肠重量。制作结肠组织石蜡切片和H＆E染色,显微镜下观察结肠组织病理形态的变化,并采用双盲法对结肠组织进行病理损伤评分。3.补脾益肠丸对记忆性T细胞分化的调节作用:采用流式细胞术（Flow Cytometry,FCM）检测小鼠脾脏单核细胞中中枢记忆性T细胞（Tcm）和效应记忆性T细胞（Tem）分化的各亚群细胞表达水平,具体为Tcm:CD45RA-CCR7+CXCR3+（cm Th1）、CD45RA-CCR7+CCR4+（cm Th2）、CD45RA-CCR7+IL-7R+（cm Th7）、CD45RA-CCR7+IL-17A+（cm Th17）、CD45RA-CCR7+Foxp3+（Foxp3+cm Treg）、CD45RA-CCR7+TIGIT+（TIGIT+cm Treg）和Tem:CD45RA-CCR7-CXCR3+（em Th1）、CD45RA-CCR7-CCR4+（em Th2）、CD45RA-CCR7-IL-7R+（em Th7）、CD45RA-CCR7-IL-17A+（em Th17）、CD45RA-CCR7-Foxp3+（Foxp3+em Treg）、CD45RA-CCR7-TIGIT+（TIGIT+em Treg）,探究补脾益肠丸能否通过调节记忆性T细胞分化治疗UC的作用机制。4.记忆性T细胞相关细胞因子检测:采用酶联免疫吸附试验（Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）法对小鼠结肠IL-4、IL-6、IL-10、IL-17A、IL-21、TNF-α等炎性细胞因子进行检测,m Th1、m Th2、m Th17、m Treg对应的效应细胞分别分泌TNF-α、IL-4、（IL-17A、IL-6和IL-21）、IL-10等细胞因子,探究补脾益肠丸调控记忆性T细胞与炎性细胞因子治疗慢性溃疡性结肠炎的机制作用。5.IL-21/IL-21R信号通路相关蛋白检测:采用Western Blot方法,对IL-21/IL-21R通路信号相关蛋白进行检测分析,探究补脾益肠丸对IL-21/IL-21R信号的调控作用。6.统计学分析:使用SPSS 22.0软件进行数据分析,组间比较采用T检验分析,以Mean±SD表示,P＜0.05代表数据统计结果具有显著差异,P＜0.01代表数据统计结果具有极显著差异。结果:1.补脾益肠丸治疗小鼠慢性溃疡性结肠炎的疗效评价:与正常组比较,模型组精神不振,饮食量显著减少,体质量明显减轻,大便稀溏,严重者有便血、肛周出血等情况;与模型组对比,补脾益肠丸低、中、高剂量组、美沙拉嗪组给药治疗后情况均有不同程度的好转,精神状态改善,饮食量和体质量均显著增加;此外,大便形态、每日OB评分及DAI评分等情况明显好转。光镜下观察结肠组织病理切片发现,经给药治疗后各组治疗组黏膜上皮均有所恢复,趋于完整,炎性浸润减少,腺体增加,结肠组织黏膜上有增生性修复的情况。2.补脾益肠丸对慢性溃疡性结肠炎小鼠记忆性T细胞分化的调节作用:通过流式细胞术对记忆性T细胞进行检测,与正常组相比,模型组Tcm细胞中CD45RA-CCR7+CXCR3+（cm Th1）、CD45RA-CCR7+IL-17A+（cm Th17）及Tem细胞中CD45RA-CCR7-CXCR3+（em Th1）、CD45RA-CCR7-IL-17A+（em Th17）数量均上升（P＜0.01或P＜0.05）,经给药治疗后补脾益肠丸高、中、低剂量及美沙拉嗪治疗组cm Th1、cm Th17、em Th1、em Th17数量均明显下降（P＜0.01或P＜0.05）;与正常组相比,模型组Tcm中CD45RA-CCR7+CCR4+（cm Th2）、CD45RA-CCR7+IL-7R+（cm Th7）、CD45RA-CCR7+Foxp3+（Foxp3+cm Treg）、CD45RA-CCR7+TIGIT+（TIGIT+cm Treg）及Tem中CD45RA-CCR7-CCR4+（em Th2）、CD45RA-CCR7-IL-7R+（em Th7）、CD45RA-CCR7-Foxp3+（Foxp3+em Treg）、CD45RA-CCR7-TIGIT+（TIGIT+em Treg）数量均明显下降（P＜0.01或P＜0.05）,治疗后补脾益肠丸高剂量组cm Th2、cm Th7、Foxp3+cm Treg、TIGIT+cm Treg、em Th2、em Th7、Foxp3+em Treg、TIGIT+em Treg数量均有所上升（P＜0.01或P＜0.05）。说明补脾益肠丸能够调节记忆性T细胞亚群分化水平的平衡。3.补脾益肠丸对慢性溃疡性结肠炎小鼠记忆性T细胞相关细胞因子的调节作用:采用ELISA检测小鼠结肠组织匀浆蛋白发现,与正常组相比,模型组结肠组织中促炎因子IL-6、IL-17A、IL-21、TNF-α蛋白表达水平明显上升（P＜0.01或P＜0.05）,抑炎因子IL-10、IL-4蛋白表达水平明显下降（P＜0.01或P＜0.05）;经给药治疗后,补脾益肠丸高剂量组结肠组织中促炎因子IL-6、IL-17A、IL-21、TNF-α蛋白表达水平明显下降（P＜0.01或P＜0.05）,抑炎因子IL-10、IL-4蛋白表达水平明显下降（P＜0.01或P＜0.05）。结果提示补脾益肠丸通过调控记忆性T细胞相关的促炎因子和抑炎因子的平衡来缓解慢性溃疡性结肠炎小鼠的炎症反应。4.补脾益肠丸对IL-21/IL-21R信号通路的影响:采用Western Blot检测IL-21/IL-21R信号通路相关蛋白发现,与正常组比较,模型组中JAK3、JAK1、STAT3、p-STAT3、STAT6、p-STAT6、IκB、NF-κB p65表达均显著升高（P＜0.01）,而IL-21R、SOCS3表达显著降低（P＜0.01）;与模型组对比,补脾益肠丸低、中、高剂量组及美沙拉嗪组中JAK3、JAK1、STAT3、p-STAT3、STAT6、p-STAT6、IκB、NF-κB p65均显著下降（P＜0.01）,而IL-21R、SOCS3显著上升（P＜0.01或P＜0.05）。此结果提示补脾益肠丸可以抑制IL-21/IL-21R信号的活化。结论:1.补脾益肠丸可有效治疗实验慢性溃疡性结肠炎。2.补脾益肠丸能有效治疗实验慢性溃疡性结肠炎可能是通过抑制IL-21/IL-21R信号途径调节记忆性T细胞分化来实现的。