芪胶升白胶囊（以下简称芪胶）为贵州苗药大品种,由血人参、黄芪、阿胶、苦参、当归、大枣、淫羊藿等七味中药制成,具保肝、升白等多种药效,临床用于肿瘤化疗辅助用药,疗效确切。芪胶由多种单味药制成,其化学成分组成复杂,主要表现为化学成分极性跨度大、含量差异性大、对照品获得难度大、同分异构体或结构类似物多,给化学成分组的全面分析带来了巨大的挑战。仅仅通过少数几个化学成分的定量分析,难以实现全面质量控制。建立从各单味药化学成分深入解析到芪胶化学轮廓表征,并在此基础上建立整个复方的质量标准,对保证临床用药的安全有效具有重要意义。因此,本研究从单味药出发,利用多种分析手段对芪胶及单味药的化学成分进行全面分析,建立特色药材血人参及芪胶的质量标准。具体研究内容和结果分述如下:1.文献综述通过查阅国内外文献,系统综述了芪胶及各单味药的化学成分、质量控制方法以及药理活性方面的研究进展。文献研究表明芪胶中主要含有黄酮、酚酸、皂苷、苯肽以及生物碱类等成分,具有抗癌、抗肿瘤、抗疲劳、抗病毒、抗炎和增强免疫力等作用,已广泛应用于临床。虽然国内外学者已对芪胶中部分单味药的化学成分进行阐明,但缺乏整个复方化学成分的深入分析,全药味质量分析方法尚未建立。因此,有必要对芪胶进行全面化学成分分析,并进一步建立质量标准,以确保临床用药的安全有效。2.特色药材血人参化学成分分析及质量标准研究进展利用液相色谱-质谱联用系统（LC-MS）对血人参的化学成分组成进行定性分析,通过对照品比对,质谱裂解规律总结,并结合文献报道,从血人参中初步鉴定了 80个化学成分,包括38个黄酮类、28个缩合鞣质类、10个酚酸类、3个萜类、2个色酮类、1个木脂素类和2个其他类;利用LC-IT-TOF-MS提供的丰富多级质谱信息,系统总结了血人参中主要化学类型黄酮类、酚酸类和缩合鞣质类化合物的质谱裂解规律;建立血人参薄层色谱（TLC）“一板多评”方法,并以毛蕊异黄酮、6,4’-二羟基-3’-甲氧基橙酮和羽扇豆醇为检测指标,对血人参进行TLC鉴别;在化学成分研究的基础上,采用高效液相色谱法（HPLC-UV）对17批血人参药材进行分析,建立血人参的特征性指纹图谱,利用中药色谱指纹图谱相似度评价软件从17批血人参药材中匹配得到7个共有峰,通过对照品指认了其中4个色谱峰;利用HPLC-UV建立了同步测定血人参中儿茶素、肉桂鞣质B-1、肉桂鞣质D-1和表儿茶素4个化学成分含量的方法,并对17个批次样品进行了定量测定;根据所建立的血人参TLC鉴别方法、指纹图谱研究方法以及含量测定方法,起草了血人参的质量标准草案。3.芪胶升白胶囊其他单味药材的化学成分分析构建在线加压液质联用系统（OLE-LC-MS）,直接分析不同基原的淫羊藿药材,结合质量亏损过滤技术（MDF）,实现黄酮类成分快速筛选。从箭叶淫羊藿、柔毛淫羊藿和朝鲜淫羊藿中初步鉴定了 99个黄酮类成分,主要为异戊烯基黄酮。其中,首次报道了黄酮类化学成分的氧化鼠李糖基取代。通过对三种淫羊藿药材的化学成分进行比较,未发现明显的种间差异。利用LC-MS技术和直接注射三维质谱技术（DI-3DMS）对当归及其他4种伞形科药材（白芷、紫花前胡、白花前胡和毛前胡）的化学成分组成进行阐明并实现快速区分。首先建立LC-MS方法,对当归及其它药材的化学成分组成进行阐明,通过对照品对比,质谱裂解规律总结,初步检测了 178个化合物,并对各成分来源进行归属。引入在线能量分辨质谱（online ER-MS）,计算各化合物的半数丰度碰撞能（CE50）值,确证化学结构。利用DI-3D MS快速采集各药材的MS1质谱信息、MS2质谱信息以及CE50值,通过多元统计分析发现藁本内酯、角型吡喃香豆素（APs）和线型呋喃香豆素（LFs）为各药材的特征性成分,实现了当归与其他伞形科相似药材的快速区分。利用LC-MS对黄芪、苦参和大枣的化学成分进行定性分析。从黄芪中初步鉴定了67个化学成分,包括56个黄酮类、9个皂苷类、1个酚酸和1个其他类;从苦参中初步鉴定了 72个化学成分,包括49个黄酮和23个生物碱类;从大枣中初步鉴定了 10个化学成分,包括2个酚酸类、7个皂苷类和1个其他类。利用nano-LC-LTQ Orbitrap Velos Pro MS采集阿胶的多肽谱,结合Swiss-Prot数据库检索,初步鉴定了 1 9个多肽类成分。进一步利用LC-Qtrap-MS技术对鉴定的多肽类成分进行确证,发现 GPAGPTGPVGK、GEAGAAGPAGPAGPR、GPPGAAGPPGPR和GEAGPAGPAGPIGPVGAR可作为阿胶的特征性多肽。4.芪胶升白胶囊化学成分组成分析及质量标准研究利用LC-MS技术对芪胶的化学成分组成进行定性分析,通过裂解规律总结,对照品验证,初步鉴定了 107个化学成分,并归属各化学成分来源;利用Qtrap-MS的多种质谱扫描模式深度挖掘芪胶的化学成分,从芪胶中初步检测了 533个化学成分,基本阐明了芪胶的化学成分组成;建立芪胶“一板多评”的TLC鉴别方法,并指认了毛蕊异黄酮、芒柄花黄素、毛蕊异黄酮苷、刺芒柄花苷、淫羊藿苷、宝霍苷Ⅰ和藁本内酯等7个指标成分;对20批芪胶进行HPLC-UV分析,建立其特征指纹图谱,通过和对照品图谱对比,确定了 15个共有色谱峰,并通过对照品对其中的11个共有峰进行指认,发现不同批次芪胶的相似度高,位于0.977～0.997之间。在定性分析基础上,利用HPLC-UV建立了芪胶特征性成分含量测定方法,对20批样品中的9个化学成分进行同步定量分析;进一步采用LC-Qtrap-MS建立低含量的槐果碱、绿原酸等成分和其他7个常量化学成分同步含量测定方法,对20批样品中9个化学成分进行同步定量分析,其中常量成分定量分析结果与HPLC-UV一致。进一步,将芪胶的TLC鉴别方法以及朝藿定C和毛蕊异黄酮苷的同步含量测定方法加入到芪胶的现行质量标准中,起草了芪胶的质量标准提升草案。综上所述,本文在系统总结芪胶及其各单味药化学成分研究进展的基础上,建立了特色药材血人参的TLC鉴别方法,利用LC-MS对其化学组成进行了定性分析,利用HPLC-UV建立了特征指纹图谱并对主要化学成分进行了含量测定,在此基础上起草了血人参的质量标准;建立了 OLE-LC-MS方法,实现了不同来源淫羊藿药材中黄酮类化学成分的直接、快速分析,发现各淫羊藿药材的化学成分组成基本一致;建立DI-3D MS方法,快速阐明了当归及其他4种伞形科药材的化学成分组,实现了当归与相似药材的快速甄别;利用LC-MS阐明了黄芪、苦参和大枣等3种单味药的化学成分组成;利用LC-Qtrap-MS确定了阿胶的特征多肽类成分;在单味药研究基础上,通过集合多种分析方法,深入阐明了芪胶全方的化学成分组成,建立了全方的TLC“一板多评”鉴别方法和特征指纹图谱,并利用HPLC-UV和LC-Qtrap-MS对全方中多个化学成分进行了同步含量测定,并进一步起草了芪胶的质量标准提升草案。本研究通过从单味药到全方,从化学成分定性分析到定量分析,全面阐明了芪胶及其特色药材血人参化学成分组成的定性、定量特征,并起草了两者的质量标准,为保障苗药大品种芪胶临床用药的安全有效提供了大量基础信息,也为其他中成药化学物质基础的阐明和质量标准的建立提供了示范。