中国西南地区猫源弓形虫株基因分型及毒力研究

来源 :安徽医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:qqq1234qqqqqqq
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的研究流行于我国西南地区(贵阳)猫源弓形虫株基因型分布及其毒力。探讨其与中国其他地区有无遗传差异,以及分离株对不同品系小鼠的毒力。方法从中国西南地区(贵阳)收集猫的标本进行动物接种,分离虫株,收集小鼠腹水中的速殖子进行提取DNA,经PCR-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP),在SAG1, SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, c22-8, c29-2, L358, PK1和Apico十个位点进行基因分型;反应总体积为50μl,其中PCR master mix25μl、上下游引物各1μl、DNA模板1.5μl。扩增条件为94℃预变性5min,然后94℃变性30s,60℃退火60s,72℃延伸90s,循环35次,最后72℃延伸10min。反应结束后,每管取5μl PCR产物在含溴化乙锭(Ethidium Bromide,EB)的1%琼脂糖凝胶中100V电泳30min,并在凝胶成像仪中观察结果。然后各管余下PCR产物经1%的琼脂糖凝胶电泳PCR产物用相应的内切酶酶切。酶切后产物经2.5%琼脂糖凝胶电泳,0.5μg/ml溴化乙锭染色后,在凝胶成像系统中观察电泳图谱,并与参考虫株图谱进行对比。经PBS稀释的纯化速殖子按1103个/只腹腔感染SPF级KM,BALB/c,C57BL,ICR小鼠,每组10只。逐日观察小鼠状态并计算死亡率和存活时间,进行毒力分析。结果采用10个遗传位点,从贵阳分离出2株弓形虫株,经PCR-RFLP分析揭示了1个基因型(ToxoDB#9, China1)。基因型China1型在SAG2、GRA6、L358、PKl、c22-8位点为基因II型;在SAG3、BTUB、c29-2位点为基因III型;在Apico位点为基因I型。BALB/c、C57BL、KM、ICR四个品系雌鼠各10只,经腹腔接种1×103个CT-1虫株速殖子。C57BL小鼠感染后第5天开始出现竖毛、腹水、抽搐等明显症状甚至死亡,第6天完全死亡。BALB/c小鼠在第5、6、7这三天之内全部死亡。KM小鼠感染后6-7天,活动减少,出现弓背、竖毛等症状,第10天死亡2只小鼠,感染后第15天至观察45天结束,小鼠恢复正常活动,一直存活。ICR小鼠相对于BALB/c、C57BL小鼠症状轻微,在第10、14天分别死亡了2只和1只小鼠,其余的在45天内存活。存活的感染小鼠45天后颈椎脱臼处死,脑组织压片发现有大量包囊形成。通过进行不同品系小鼠毒力研究显示:CT-1虫株感染C57BL、BALB/c、KM、ICR小鼠死亡率有显著差异(P<0.01),C57BL、BALB/c小鼠两者之间及KM、ICR小鼠两者之间对虫株无显著差异(P>0.01)。结论虽然从世界各地人体和动物体内分离得到的虫株的基因分型结果显示,各地刚地弓形虫具有丰富的遗传多态性。然而中国大陆虫株的基因分型结果与欧洲、非洲和北美的3个优势克隆株系截然不同:流行中国的动物源性弓形虫分离株具有有限的遗传多样性,弓形虫China1为其优势基因型;在生物多样性较为丰富的我国西南地区(贵阳),China1型(ToxoDB#9)为其优势基因型,流行我国的弓形虫分离株具有有限的遗传多态性;该型CT-1虫株对不同品系小鼠的致死力具有显著性差异。
其他文献
一、确立指导思想,明确教学目的rn心理差异研究课题的提出是新世纪教育工作的需要,重在转变教师的教育观念,树立向科研要质量的思想,尊重并承认学生的差异.教师教学活动的目
繁衍于中华大地的中华民族在几千年间的生存发展中,在无数人的努力下孕育而生的中华优秀传统文化,源远流长,博大精深.弘扬中华优秀传统文化、传承中华民族精神是每一个公民应
《幼儿园工作规程》中指出:“幼儿教育是基础教育的重要组成部分,是我国学前教育和终身教育的奠基。”在幼儿各年龄班中,三四岁的幼儿为小班,幼儿园对小班的要求是:以保为主
摘 要:在“全语文教育”的“四全”理念指导下,教师的语文教学和学生的语文学习都会是一个全新的世界。实践过程中,巧妙运用一些“小动作”,获得了一些新突破。聽记:融汇听说读写的训练;反串:学生当教师,教师当学生;结集:让学生拥有语文作品;质疑:将学生的思维引向深入。  关键词:听记 反串 结集 质疑  “全语文教育”着意于学生人文底蕴与语文综合素养的全面发展,着眼于学生语文听、说、读、写、思能力的全面
小学阶段开设了道德与法治这门学科,让学生的安全教育更全面、更具象.教师在教授这门学科时,应当充分运用多媒体技术来模拟安全问题场景,并且加强教生之间的互动,教育学生将
工程造价贯穿于整个建筑工程的建设过程,但是在工程造价实际控制过程中存在着诸多不确定性因素,加大了对其管理的难度,表现为动态性管理。那么在实际工作中,我们应该如何应对工程
摘 要:英语作为一门国际性的语言在全球化进程中扮演着重要的角色,由于学生英语兴趣和学习能力的差别使得不同学习水平的学生存在,学困生受制于英语难以激发学习兴趣使得学习效率低下,深入分析英语学困生的成因,针对帮扶提出行之有效的策略。   关键词:小学;英语;学困生;情感障碍   新课程改革的深入发展使得面向全体学生的公平性教学得以进行,重视学困生的转化是提升英语听力教学质量的关键环节,教师要通过恰
摘 要:《义务教育数学课程标准》要求:“结合数学教学内容和学生实际,对学生进行思想品德教育,使学生逐步树立科学的世界观和人生观是数学教学的一项重要任务。”因此,数学教师要牢记并贯彻国家领导人提出的立德树人的思想,并认识到在小学数学的教学中思想品德教育的渗透具有非常重要的作用。   关键词:立德树人;小学数学教学;思想品德教育   德育是每一个学生在学校所受教育的一个重要组成部分,尤其是小学生,思
请下载后查看,本文暂不支持在线获取查看简介。 Please download to view, this article does not support online access to view profile.
夜晚的气息里混杂着血人工智能的低语血人工智能像一道血色匹练,自由飞舞着就连蓝的光亮在这血练面前,也黯淡下来,仿佛村子人工智能对即将发生的惨状充满着恐惧。 In the br
期刊